注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:150、75、37.5、18.7、9.3、0ng/ml.
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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