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产品信息:pall过滤器公司主要产品:
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ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
1. 将目的基因与IPTG诱导表达载体连接,构成重组质粒并转化相应的表达用的大肠杆菌。将转化体铺于含相应抗生素的LB平板,37℃培养过液。通过酶切序列分析等筛选带有插入片段的转化体。
2. 分别挑取对照菌和重组菌1个菌落,接种于1ml含有相应抗生素的LB培养液中,37℃通气培养过液。
3. 取100微升过液培养物接种于5ml含有相应抗生素的LB培养液中(各10份),适当的温度(20-37℃)震荡培养4小时,至对数中期(A550=0.1-1.0)。
4. 对照菌和重组菌各取1ml未经诱导的培养物于离心管中,剩余培养物中加入IPTG至终浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0mM相同的温度继续通气培养。
5. 在诱导的1,2,3,4,5个小时取1ml样品于Ep管中。
细菌的生长速率严重影响外源蛋白的表达,因此必须对接种菌量,诱导前细菌生长时间和诱导后细菌密度进行控制。生长过度或过速会加重细菌合成系统的负担,导致包涵体的形成。生长温度可能是影响大肠杆菌高度表达目的蛋白的Z重要因素。低温培养能在一定程度上YZ包涵体的形成。IPTG的浓度对表达水平的影响也非常大。所以通过试验确定Z佳的培养条件是很必要的。
6. 将所有样本室温Z高速度离心1分钟,弃上清,沉淀重悬于100微升1×SDS蛋白上样缓冲液中,100℃加热5分钟,室温Z高速度离心1分钟,取15微升样品上样于SDS聚丙烯酰胺凝胶,用SDS-PAGE观察表达产物条带,从而确定优化的培养条件。
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这个新的成像技术,被称为振动光谱显微技术,它可以被用来可以跟踪和识别特定的分子,这种技术是通过测定分子们的的振动光谱来跟踪和识别它们的。
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