定量(Absolute Quantification,AQ)
分析用于确定未知样本中某个核酸序列的量值,即通常所说的拷贝数,应用与病原体检测,转基因食品检测,及基因表达研究。
SYBR Green特性:
(1)只有和双链DNA结合后才发荧光。
(2)变性时,DNA双链分开,无荧光。
(3)在延伸结束阶段采集荧光信号。
(4)SYBR Green也能和非特异性的双链DNA结合发光,所以必须在反应结束时做熔解曲线分析。
TaqMan探针的特性:
(1)5′端标记有报告基团(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q)
(3)探针完整,R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ,无荧光, R与Q分开,发荧光(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探针。
定量的标准样品:
(1)含有和待测样品相同扩增片段的克隆质粒
(2)含有和待测样品相同扩增片段的cDNA
(3)PCR的产物,可分别做系列稀释。
服务流程:
步骤 | 客 户 提 供 | 服 务 内 容 | 基 屹 提 供 |
1 | 新鲜的且尽量多的材料;已知的全长基因序列;尽可能详细的背景资料:DNA/ RNA来源、丰度等。 | DNA/RNA提取,根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。 | |
2 | 纯化好的DNA/RNA(大于5 ug/样品);已知的全长基因序列;尽可能详细的背景资料:DNA/ RNA来源、丰度等。 | 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。 | |
3 | | 以DNA为模板,对目的基因进行荧光定量PCR检测分析 | 提供完整的定量分析结果、实验荧光定量扩增曲线及详细的实验步骤。 |
注意:客户可根据所能提供的起始材料不同,选择从步骤1或2启动项目。