Elisa试剂盒组成 :
1.标准品
2.标准品稀释浓
3.酶标包被板
4.链霉亲和素
5.20倍浓缩洗涤浓
6.显 色剂A液
7.显色剂B液
8.终止液等
产品特性:
1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R,大于等于0.9900。
2.灵敏度:Z低检测浓度小于10 pg/ml。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
科研检测保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月
样品收集、处理及保存方 法:
1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激.使用不含热原和内毒素 的试管.收集血浓后,1000xg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离
2、血浆......EDTA.柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测.1000xg离心30分钟去除颗粒 .
3.细胞上清液......1000 xg离心10分钟去除颗粒和聚合物.
4,组织匀浆……将组织加入适量生理盐水揭碎.1000xg离心10分钟, 取上清液.
5.保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70C保存,避 免反复冷冻.尽可能的不要使用溶血或高血脂血.如果血清中大量颗粒,检 测 前 先 离心或过滤。不要在37C或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻 并确 保样 品均匀 地充分解冻。具体详见说明书
常见elisa试剂盒操作步骤:
用于检测未知抗原的双抗体夹心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
所需要的器材:
(1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。
(2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
(3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。