实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人膜辅蛋白(MCP/CD46)水平。用纯化的人 生长因子结合蛋白4抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人膜辅蛋白(MCP/CD46)再与 HRP 标记的人硫酸脑苷酯(SFT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复
合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的
作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的人膜辅蛋白(MCP/CD46)呈正相关。用酶标
仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人膜辅蛋白(MCP/CD46)
浓度。
试剂盒组成
1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
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2 | 酶标试剂 | 6ml×1 瓶 | 8 | 标准品(80pg/ml) | 0.5ml×1 瓶 |
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3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 |
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4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
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5 | 显色剂 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
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6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
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标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
- 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
40pg/ml | 5 号标准品 | 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
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20pg/ml | 4 号标准品 | 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
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10pg/ml | 3 号标准品 | 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
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5.0pg/ml | 2 号标准品 | 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
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2.5pg/ml | 1 号标准品 | 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
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- 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品Z终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
- 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
- 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
- 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。
- 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
- 温育:操作同 3。
- 洗涤:操作同 5。
- 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
- 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
- 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间Z好
控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,Z好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值
大于标准品孔*孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
人鸟苷酸解离YZ因子(GDI)ELISA试剂盒 |
人八聚体转录因子(OTF2B)ELISA试剂盒 |
人八聚体转录因子(OTF2A)ELISA试剂盒 |
人脱氧尿三磷酸(DUTP)ELISA试剂盒 |
人协同刺激分子受体(CMR)ELISA试剂盒 |
人肽聚糖(PG)ELISA试剂盒 |
人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA试剂盒 |
人甘露糖(MN)ELISA试剂盒 |
人延伸蛋白A(EloA)ELISA试剂盒 |
人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒 |
人杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)ELISA试剂盒 |
人细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA试剂盒 |
人复制蛋白A(RPA-70)ELISA试剂盒 |
人软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒 |
人抗原提呈相关转运蛋白/T细胞活化蛋白(TAP)ELISA试剂盒 |