HPDE6-C7人正常导管上皮细胞系 专业传代培养技术指导

HPDE6-C7人正常导管上皮细胞系 专业传代培养技术指导
DPD培养基，英文名：DPD Medium，用途：用于原生质体的培养
WEHI-3细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NB4(NB-4)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HOK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
L Wnt 3A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：4-1：10传代；2-3天换液1次。
化十六烷基三甲铵琼脂培养基，英文名：Ctrimide Agar Base，用途：用于铜绿假单胞菌的选择性分离
巧克力血琼脂培养基基础，英文名：Chocolate Blood Agar Medium Base，用途：用于奈瑟球菌、流感嗜血杆菌的培养,需添5%~10%无菌脱纤维绵羊全血
Hs 729细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
豆粉琼脂，英文名：Soya Flour Agar，用途：用于血琼脂制备,需添加无菌脱纤维绵羊全血
NCI-H2052细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：6传代
RGM-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人上皮膜抗原(EMA)ELISA试剂盒，英文名：Human EMA ELISA Kit，规格：48T/96T
人线粒体融合素1(MFN1)ELISA试剂盒，英文名：Human MFN1 ELISA Kit，规格：48T/96T
Hs746T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：3传代,2-3天传一代
RAW 264.7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
放线菌肉汤，英文名：Actinomycete Broth，用途：用于放线菌的培养
Rustigian氏尿素培养液，英文名：Rustigian Urease Test Medium，用途：用于细菌尿素试验
MS微量元素，英文名：Murashige & Skoog Micronutrients，用途：用于植物组织培养
人凋亡相关因子(Fas/APO-1)ELISA试剂盒，英文名：Human Fas/APO-1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒，英文名：Human NT-4 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
大鼠白介素32(IL32)ELISA试剂盒，英文名：IL32 ELISA Kit，规格：48T/96T
发根农杆菌培养基(YEB)，英文名：Agrobacterium rhizogene Medium，用途：用于发根农杆菌的培养
察氏肉汤，英文名：Czapek Dox Broth，用途：用于真菌的培养
贴壁消化难题：1，先用PBS 把细胞洗两遍，使瓶内没有血清了，减少对胰酶的中和，然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右，放在37度，然后可以在细胞有些消化下来时，拿着瓶口，运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体，这样细胞很快就下来了，还不需要吹打，分散也均匀；2，成团、絮状：消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉，也可以不倒，直接加血清终止，如果消化液中加入了edta的话，就要将消化液倒干净，如果细胞贴壁要求不是很严格的话，一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强，用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势)，随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶)，加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片)；消化过度：马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培养，状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉！
m-TGE肉汤，英文名：m-TGE Broth，用途：用于滤膜法测定奶制品中的菌落总数
细胞背景资料：详见相关文献介绍
Elek氏培养基，英文名：Elek Medium，用途：用于致泻大肠埃希氏菌的毒素测定
BC-023细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H460细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
DOK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
L-6TG细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
UMO培养基，英文名：UM Medium without 2,4-D and KT，用途：用于诱导体胚分化
念珠菌BCG琼脂基础，英文名：Candida BCG Agar / Candida Bromcresol Green Agar，用途：用于念珠菌的选择性分离和培养,每200ml添加5支新霉素溶液
PEA琼脂基础，英文名：Phenylethyl Alcohol Agar Base，用途：用于从样本中分离革兰氏阳性球菌,每95ml添加5ml无菌脱纤维绵羊全血和1支β-乙醇
HSAS3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TE7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2122细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：1：3-1：4传代；每周换液2-3次。
碱性胆盐琼脂，英文名：Alkaline Bile Salt Agar，用途：用于霍乱弧菌的选择性分离
改良克氏柠檬酸盐琼脂，英文名：Christensen Citrate Agar , Modified，用途：——用于柠檬酸盐利用实验
念珠菌显色培养基，英文名：Candida Chromogenic Medium，用途：用于念珠菌快速检测
细胞形态特性：详见细胞说明书
Z近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，1XPBS漂洗两次，加入1mlEDTA-Tripsin（100mm皿为例），37度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代Z重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
人血管生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA试剂盒，英文名：Human ANG-R-Tie1 ELISA Kit，规格：48T/96T
放线菌肉汤，英文名：Actinomycete Broth，用途：用于放线菌的培养
甘露醇化钠琼脂琼脂培养基，英文名：Mannitol Salt Agar，用途：ZG药典2015，用于金黄色葡萄球菌选择性分离
人肌酸激酶MB同工酶(CKMB)ELISA试剂盒，英文名：Human CKMB ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒，英文名：DAO ELISA Kit，规格：48T/96T
人前心钠肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒，英文名：Human Pro-ANP ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞接收后的操作流程与注意事项：1)如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决；2)贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度(不能超过20%)，或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养；3)生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。
吲哚亚盐培养基，英文名：Indole Nitrite Medium，用途：用于细菌的盐分解试验和吲哚试验
FHs 74 Int细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
NCI-H2085细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：6传代
MFC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SUNE-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。