产品内容
产品特点
操 作 简 单 快 速——Z快1min即可得到变性总蛋白；
无 蛋 白 丢 失——可打开DNA双链，GX获取与DNA结合的蛋白；
小样本量、高得率——Z小可处理20μL样本与裂解液混合物，提取的蛋白溶液浓度可达2~8mg/mL；
适 用 多 种 实 验——含有两种裂解液，既可用于提取变性蛋白质，也可提取天然蛋白质。
产品简介
本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法，能够快速、温和、GX地裂解动物组织或细胞，有效提取总蛋白。试剂盒同 时提供变性和天然两种裂解液，用户可根据下游实验需求进行选择。整个提取过程仅需要1~8min，由于采用过柱纯化技术，Z小可处理20μL样本与裂解液混合物，可达500μL，提取的蛋白溶液浓度可达2~8mg/mL，并可有效避免蛋白丢失。所提蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析（货号：ZJ101 或ZJ102），但不．宜．使用 Omni-Rapid™快速蛋白定量试剂盒（ZJ103）。
使用说明
A. 提取变性总蛋白
1. 将纯化柱及接收管套管放在冰上预冷；
2. 样品处理（取适当量的 变性裂解液 ，在使用前数分钟将 蛋白酶YZ剂混合液 按 1:100 加入其中； PC201plus 已包含 蛋白酶YZ剂混合液 ，PC201则需额外购买<货号：GRF101>。）
2a. 贴壁细胞：将预冷的PBS直接加入培养板、培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。按照附表（文末）中将相应体积的 变性裂解液 均匀地加入整个器皿表面，用移液器吹打几次。
2b. 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5mL离心管中加入预冷的PBS，涡旋震荡，3,000rpm离心2~3min清洗细胞。吸去多余上清，留下与细胞相同体积的PBS。涡旋震荡重悬细胞。加入
附表中相应体积的 变性裂解液 ，涡旋震荡裂解细胞。
注意：部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果。
2c. 组织：将15~20mg组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50~60次，加入200μL 变性裂解液 ，继续研磨30~60次。如果组织样本起始量较大或者较小，需按比例调整相应裂解液
的用量。
注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。
3. 离心
3a. 贴壁细胞或悬浮细胞：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14,000~16,000rpm离心30s取出。
3b. 组织：盖上纯化柱盖子室温孵育1~2min，14,000~16,000rpm离心1~2min取出。
4. 立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，变性总蛋白提取完成。
B. 提取天然总蛋白
1. 将天然细胞裂解液，纯化柱及接收管套管放在冰上预冷；
2. 样品处理（取适当量的 变性裂解液 ，在使用前数分钟将 蛋白酶YZ剂混合液 按 1:100 加入其中；PC201plus 已包含 蛋白酶YZ剂混合液 ，PC201则需额外购买<货号：GRF101>。）
2a. 贴壁细胞：将预冷的PBS直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。按照附表中将相应体积的 天然裂解液 均匀地加入整个器皿表面，放置于冰上孵育3~5min，用移液器吹打几次。
2b. 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5mL离心管中加入预冷的PBS，涡旋震荡，3,000rpm离心2~3min清洗细胞。吸去多余上清，留下与细胞相同体积的PBS。涡旋震荡重悬细胞。加入
附表中相应体积的 天然裂解液 ，涡旋震荡裂解细胞15s。将离心管放置于冰上3~5min，然后涡旋震荡10s。
注意：
① 部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果；
② 加入裂解液后，如果细胞裂解物太过粘稠，无法用200~1,000µL吸头吹打，可将细胞裂解物直接倒入倒入纯化柱中，进行后续操作。
2c. 组织：将15~20mg组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50~60次，加入200μL 天然裂解液 ，继续研磨30~60次。如果起始量较大或者较小，需调整相应裂解液的用量比例。 注
意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。
3. 离心
3a. 贴壁细胞或悬浮细胞：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14,000~16,000rpm离心30s 取出。
3b. 组织：开盖冰上孵育5min，盖上纯化柱盖子，4℃，14,000~16,000rpm离心1~2min取出。
4. 立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，天然总蛋白蛋白提取完成。
附表 细胞数量与所需裂解液体积之间的关系
注意事项
1. 如需提取磷酸化蛋白请在 变性/天然裂解液 中加入 磷酸酶YZ剂混合液（货号：GRF102）；
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
3. 本产品科研使用。
沪公网安备 31011502008050号
