XH007 真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱

真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱式)哪里卖

编号：XH007

规格：50T/200T

产地：国产|进口

品Pai：百奥莱博

原理简介

真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液液氮研磨。经过前期处理的菌液，再经过裂解液及蛋白酶处理后，玻璃奶吸附DNA，去掉其他杂质，，可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。

注意事项

1．由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。

2．如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA片段很短，成弥散条带，可减少玻璃珠处理时间。

操作步骤

1．样品的处理：

1）对于酵母菌，取1-2ml培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入300ul 裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5-10min。

2）霉素(孢子也可相同处理)：取50-100mg菌丝，加300ul裂解液，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约30min。

3）大型真菌（如蘑菇等）：称取50-100mg样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复3 次，使样品研成粉末（如无液氮，可加300ul裂解液后用玻璃研磨器适当研磨），加300ul裂解液，加入10ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5min。

2．加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，55℃水浴消化，15－30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次。

3．12000转离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。

4．在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。

5．12000rpm离心5分钟，去上清，核酸在沉淀中。

6．沉淀中加入500ul结合液，55℃水浴1-2分钟，核酸沉淀可溶解。

6．玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。

7．室温放置10分钟（如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入50－100ul TE缓冲液混匀溶解，55℃水浴5分钟。离心，取上清为所提基因组。

8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。



欲咨询购买真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱式)哪里卖，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：



·TE缓冲液(PH=8.0)

编号：XH025

规格：100ml/500ml

TE是DNA（基因组或者质粒）常用的一种溶解试剂。

试剂组成：TIRS-HCl(10mM)，EDTA(1mM)，PH8.0

T代表Tirs（10mM），E代表EDTA(1mM)。Tirs起着调节PH值和提供缓冲力的作用，让核酸有一个适合的PH值条件。而EDTA起着敖合金属离子的作用，让酶（如DNA酶）失去作用。细菌也不容易生长，从而更好的保护核酸不被降解。并且EDTA浓度为1mM，对下游的酶切，PCR等没有影响。

此产品未经DEPC处理，一般不用于RNA实验。



·5×蛋白上样缓冲液（配有β-巯基乙醇）

编号：XH056

规格：10ml

产品简介：

本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，β-巯基乙醇，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。

SDS可与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异，SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构，消除了蛋白结构之间的差异。终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。

保存时间：

未混合前2-8℃可保存一年，混合后保存三个月。

使用说明：

1． 根据用量，以每1ml的5×蛋白上样缓冲液加入50ulβ-巯基乙醇，混匀。此即为配好的蛋白上样缓冲液。此配好的蛋白上样缓冲液在2-8℃保存三个月。

2． 请按每40微升蛋白样品加入10ul配好的上样缓冲液的比例来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。

3． 混匀后，100℃水浴加热3-5分钟，使蛋白变性。

4． 冷却到室温后，离心数秒后，混均再离心30秒取上清直接上样即可。

注意事项：

β-巯基乙醇味道特别难受，所有操作是在通风柜中操作。如果没有通风柜，也尽量找一通风处操作，或者使用5×蛋白上样缓冲液（含DTT）。

8%胶时溴酚蓝大概在30kd左右， 12%胶时，约在20kd左右，15%胶时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。





真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱式)哪里卖关键词：真菌基因组DNA提取试剂盒,XH007,非柱式





·Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液（干粉）

编号：XH059

规格：10L

所用试剂：Tris碱，甘氨酸和 SDS

含量配方： 30.3 Tris碱

188g 甘氨酸

10g SDS

此产品为干粉混合物。用时可以用双蒸水溶解成1L，配成10倍浓缩液，用时再稀释10倍。

配好的电泳液用于SDS－PAGE蛋白电泳。可反复使用三到五次，如果发现有明显沉淀或者漂浮时，请丢弃换新的。



·动物线粒体DNA提取试剂盒

编号：XH001

规格：50T/100T

二，保存条件

本试剂盒整体保存于2-8度一年。使用前，在DNA酶I中加入600ul（50T）或者1100ul（100T）的DNA酶反应液，分装后-20度保存。线粒体裂解液使用前常温保存，如有沉淀可37度水浴溶解，不影响使用。

三，说明

线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。本试剂盒利用差速离心到比较纯净的线粒体，再利用DNA酶消化裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA，后得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。

本试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞线粒体DNA的提取制备。不适合植物及其他标本的提取。

四，操作步骤

准备工作：在DNA酶I中加入600ul（50T）或者1100ul（100T）的DNA酶反应液，适当分装后-20度保存。线粒体裂解液保存于常温，如有沉淀37℃水浴溶解，离心机温度下降到4℃（2-8℃），如无低温离心机，也可以常温离心，并将离心时间为10min的改为5min，但后所得DNA品质及产量可能会有一定影响。

1. 样本处理

a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次；

b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次；

2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min；

3. 取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心5 min。

4．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；

5. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min；

6．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；

7. 加入100ul DNA酶反应液重悬线粒体，吹打均匀后，再加入10ul DNA酶I溶液（见准备工作），混匀，37度水浴10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃， 12,000 × g 离心5 min。尽可能的弃上清，再加入200ul TE 重悬线粒体沉淀，离心，洗去残留的DNA酶。

8.得到的沉淀，用100ul TE 重悬线粒体沉淀。加入200ul线粒体裂解液，轻轻混匀（不可吹打），放置2min左右，不超过5min，再加入150ul蛋白沉淀液，迅速混匀。4℃， 12,000 × g 离心5 min。此步骤可进一步去除核DNA。

9．取上清，加入一新的离心管中（可选用等体积的酚氯仿异戊醇25:24:1抽提一次，再用氯仿抽提一次，或者直接用氯仿抽提两次，一般来说，此步可省，并不影响后续的PCR），加入0.6倍体积的异丙醇（如无异丙醇，可加入2.5倍体积的乙醇沉淀DNA）及10ul 核酸核酸助沉剂，混匀，-20℃沉淀半小时左右（此步可省），4℃， 12,000 × g 离心10 min。

10. 弃上清，再加入1ml 70%乙醇，4℃， 12,000 × g 离心10 min。重复用70%乙醇洗一次。

11. 弃上清后再次离心1min 吸弃上清，开盖凉干约5-10分钟。

12．加入20-30ul TE缓冲液,轻弹管底，37度水浴5分钟，线粒体DNA溶解。

13. 进行DNA电泳检测及-20度保存，进行下步的实验。

四 注意事项：

1. 为保证获得完整及尽可能多的线粒体，匀浆条件要示：一是全程低温操作。第二是快速。第三，如用条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。

2．线粒体DNA本身含量很低，如果电泳检测不到，可加大上样量，用更少量的TE溶解沉淀，或者直接进入PCR检测。

2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。



一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。

转速与离心力换算

G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２

G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；

[rpm] ２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。





真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱式)哪里卖关键词：真菌基因组DNA提取试剂盒,XH007,非柱式



BTN100835 胃蛋白酶YZ剂溶液 Pepstatin Solution

ARB11131 人肺癌标志物elisa检测操作说明书 Human lung cancer marker ELISA KIT

橙黄Ⅳ HPCD 554-73-4

BL1107 抗体稀释液(普通型)

3-羟基苯甲醛 2,6-Dichlorophenolindophenolsodium salt 100-83-4

十三烷酸 MISIN 638-53-9

无机磷检测试剂盒(硫酸亚铁钼蓝微板法)   100T

ARB10502 人白细胞介素11(IL-11)含量分析 Human interleukin 11,IL-11ELISA KIT

ARB12130 大鼠甲状旁腺激素(PTH)ELISA检测服务 Rat paRathyroid hormone,pth ELISA KIT

HC0261 Eppendorf大容量电动移液器

ARB13881 猪白血病YZ因子受体(LIFR)Elisa分析 Porcine leukemia inhibitory factor receptor,lifr ELISA KIT

ARB12680 大鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)elisa测定使用说明书 Rat bladder tumor antigen,bta ELISA KIT

PY04-019  无菌液体石蜡  5 ml×10支  滴加一层无菌液体石蜡于接菌的氨基酸脱羧酶培养基中  防止因空气进入使培养基氧化

我公司正在火爆促销DNA纯化系列产品，欢迎您的垂询选购真菌基因组DNA提取试剂盒(非柱式)哪里卖。