DAPI是一种可对DNA 染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。DAPI常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。尽管DAPI不能通过活细胞膜,但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用来检测酵母线粒体DNA,叶绿体DNA,病毒DNA,microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。
实验步骤:
(1) 用1mL ddH2O将DAPI溶解,制得2.9mM的DAPI溶液(1mg DAPI/1mL H2O)。
注:DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解,需要先用水将其溶解。
(2) 取适量DAPI水溶液加到PBS中,制备成10~50µM的DAPI溶液。
(3) 将1/10培养基体积的DAPI溶液加入到细胞培养基中。也可以用1/10浓度的DAPI缓冲液代替培养基。
(4) 在37℃培养细胞10~20分钟。
(5) 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
(6) 用带有360nm激发波长,460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
注意事项:
DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
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