产品说明:逆转录酶能以RNA或单链DNA为模板起始合成互补的DNA链。MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)是M-MLV逆转录酶的突变型,点突变去除了RNase H的活性ZX,使RNase H的活性降低,减少了逆转录反应中RNA的降解,使cDNA链的得率增加,更容易获得全长cDNA。
来源:E.coli 菌株,含有突变型莫洛尼氏鼠白血病病毒(M-MLV)逆转录酶基因。
产品应用:链cDNA的合成;RT-PCR反应。
产品纯度: 200U的本酶和1μg的16S、23S rRNA在37℃下孵育1h,电泳条带无肉眼可见的变化。
推荐的反应条件:
cDNA链的合成
1) 在无RNase的PCR管中加入:Oligo dT12-18 (1μg/μl)或随机引物(50-250ng)1μl;Total RNA (10ng-5μg)或mRNA(1-500ng)xμl;dNTP (10mM each)1μl;DEPC ddOH2 (14-x)μl。
2) 70℃保温10分钟后迅速冰浴2-10分钟。
3) 离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4) 向上述反应液中加入:5×RT Buffer 4μl;RNasin (40U/μl) 1μl;轻轻吸打混匀。
5) 42℃保温2分钟(Oligo dT12-18或基因特异引物);如果是随机引物则25℃保温10分钟。
6) 加入1μl MMLV逆转录酶,混匀后42℃保温50分钟。
7) 70℃ 保温15分钟后置冰上冷却,得到cDNA。该产物可直接用于第二链的合成或RT- PCR扩增反应,保存请置于-20℃。