MTT检测试剂盒

MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物。通过酶标仪可以测定吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
操作说明：
1. 将细胞在培养箱中常规培养，待细胞处于对数生长期时用0. 25%胰蛋白酶常规消化，配制细胞悬液，置于CO₂（5％）培养箱中37℃下培养以贴壁。
2. 待细胞贴壁过夜后，分别加入含药培养基培养，同时设不加药的对照组和和只加培养液的调零孔，每组处理设三个重复。
3. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升500个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升1000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。
4. 每孔加入20微升MTT工作液，在细胞培养箱内继续孵育4小时。
5. 四小时后待孔板底部出现少量紫色结晶，在40倍显微镜下观察发现部分细胞周围出现丝状紫色结晶时，可立即停止实验。
6. 小心缓慢吸取孔板内上清溶液（切勿吸走底部紫色结晶），完全吸出后，加入DMSO  100微升。通常37℃孵育15分钟左右（可用手指轻微敲击板底小幅度震荡），待紫色结晶全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长一些。
7. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。
注意事项：
 1、DMSO在较低温度时会凝固，可以于37度复溶。