GX E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次_详细资料

产品信息

高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次存放时间不能超过该温度下的Z长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到的温度。

GX E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
GX E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
GX E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由大肠杆菌 K12 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
人STAT3蛋白YZ分子(PIAS3)ELISA KitHuman PIAS3 ELISA Kit
人Spondin-2 ELISA KitHuman Spondin-2 ELISA Kit
人SPARC相关模块化钙结合蛋白2(SMOC2)ELISA KitHuman SMOC2 ELISA Kit
人SPARC相关模块化钙结合蛋白1(SMOC1)ELISA KitHuman SMOC1 ELISA Kit
人SMAD3 ELISA KitHuman SMAD3 ELISA Kit
人SMAD2 ELISA KitHuman SMAD2 ELISA Kit
人SHC转化蛋白1(SHC1)ELISA KitHuman SHC1 ELISA Kit
人Salusin Beta(Salusin β)ELISA KitHuman Salusin Beta,Salusin β ELISA Kit
人Salusin Alpha(Salusin α)ELISA KitHuman Salusin Alpha,Salusin α ELISA Kit
人SAA/LDL复合物 ELISA KitHuman SAA/LDL Complex ELISA kit
人S100钙结合蛋白P(S100P)ELISA KitHuman S100P ELISA Kit
人S100钙结合蛋白A8/A9复合物(S100A8/A9)ELISA KitHuman S100 calcium-binding protein A8/A9 complex,S100A8/A9 Elisa kit
人S100钙结合蛋白A6/钙粒蛋白A(S100A6)ELISA KitHuman S100A6 ELISA Kit
人S100钙结合蛋白A12/钙粒蛋白C(S100A12)ELISA KitHuman S100A12 ELISA Kit
人S100钙结合蛋白A11(S100A11)ELISA KitHuman S100A11 ELISA Kit
人RNA结合蛋白FUS(FUS/TLS)ELISA KitHuman FUS/TLS ELISA kit
人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)ELISA KitHuman Rock-2 ELISA Kit
人Rho GDP解离YZ因子1(ARHGDIA/GDIA1)ELISA KitHuman ARHGDIA/GDIA1 ELISA kit
人Q热科克斯体2(Q fever)抗体(IgM)ELISA KitHuman coxiella burnetii Q fever phase 2(Q fever)antibody(IgM)ELISA kit
人Q热科克斯体2(Q fever)抗体(IgG)ELISA KitHuman coxiella burnetii Q fever phase 2(Q fever)antibody(IgG)ELISA kit
人Q热科克斯体1(Q fever)抗体(IgG)ELISA KitHuman Q fever IgG ELISA Kit
人Q热科克斯体1(Q fever)抗体(IgA)ELISA KitHuman coxiella burnetii Q fever phase 1(Q fever)antibody(IgA)ELISA kit
人P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA KitHuman P-Selectin ELISA kit
人Prominin 2(PROM2)ELISA KitHuman PROM2 ELISA Kit
人PL7抗体/抗苏氨酰tRNA合成酶(PL7)ELISA KitHuman anti-PL7-antibody ELISA Kit
人PL12抗体/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)ELISA KitHuman anti-PL12-antibody,PL12/AlaRS ELISA Kit
人PC4,SFRS1互动蛋白1(PSIP1)ELISA KitHuman PSIP1 ELISA kit
人P53抗体ELISA KitHuman P53 antibody ELISA Kit
人P2蛋白抗体(IgM)ELISA KitHuman myelin protein two antibody IgM ELISA Kit
人P2蛋白抗体(IgG)ELISA KitHuman myelin protein two antibody IgG ELISA Kit
人P0蛋白抗体(IgM)ELISA KitHuman myelin protein zero antibody IgM ELISA Kit
人P0蛋白抗体(IgG)ELISA KitHuman myelin protein zero antibody IgG ELISA Kit
人OJ抗体/抗异亮氨酰tRNA合成酶抗体(OJ/IleRS)ELISA KitHuman anti-OJ-antibody，OJ/IleRS ELISA Kit
人N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)ELISA KitHuman N-methyl-D-aspartic Acid Receptor,NMDAR ELISA Kit
人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)ELISA KitHuman N-Cad ELISA kit
人NET-1 ELISA KitHuman NET-1 ELISA Kit
人NADPH氧化酶3(NOX3/MOX2)ELISA KitHuman NOX3 ELISA kit
GX E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次人NADPH氧化酶1(NOX1/MOX1/NOH1)ELISA KitHuman NOX1 ELISA kit
人N1,N12-二乙酰基精铵 ELISA KitHuman N1 N12 Diacetylspermin ELISA kit
人N(ε)羧乙基赖氨酸(CEL)ELISA KitHuman N(epsilon)(carboxyethyl)lysine(CEL)ELISA kit
人N -甲基- D -天冬氨酸抗体IgG(NMDA Antibody IgG)ELISA KitHuman NMDA Antibody IgG ELISA Kit
人MYC诱导核抗原(MINA)ELISA KitHuman MINA ELISA Kit
人MAP磷酸酶双特异性磷酸酶1(DUSP-1)ELISA KitHuman DUSP-1 ELISA Kit
人L-肾上腺素ELISA KitHuman L-Adrenali ELISA kit
人L-氨基酸氧化酶(LAO)ELISA KitHuman LAO ELISA Kit
人Klotho ELISA KitHuman Klotho ELISA Kit
人KI-67抗原(Ki-67)ELISA KitHuman KI-67 ELISA Kit
人IV形胶原蛋白α3链(COL4A3)ELISA KitHuman COL4A3 ELISA kit
人Igγ3链C区(IGHG3)ELISA KitHuman IGHG3 ELISA Kit
人ICOS配体(ICOSLG)ELISA KitHuman ICOSLG ELISA Kit
人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA KitHuman ICE protease-activating factor,IRAP ELISA Kit
人I 型胶原蛋白(COL I)ELISA KitHuman Collagen Type I,COL I ELISA Kit
人H-钙粘着蛋白/H-钙粘连蛋白(H-Cad/CDH13)ELISA KitHuman E-Cadherin ELISA Kit
人HSP60 IgM抗体ELISA KitHuman Hsp60 IgM antibody ELISA kit
人HSP60 IgG抗体ELISA KitHuman Hsp60 IgG antibody ELISA kit
人HSP60 IgA抗体ELISA KitHuman Hsp60 IgA antibody ELISA kit
人HLAⅡ类组织相容性抗原，DPα1链(HLA-DPA1)ELSIA kitHuman HLA-DPA1 ELSIA kit
人HIV-1 TAT互动蛋白2(HTATIP2/TIP30)ELISA KitHuman HTATIP2 ELISA Kit
人HIV(1+2)抗原抗体ELISA KitHuman HIV(1+2)antigen antibody ELISA Kit
人G蛋白偶联受体152(GPR152/PGR5)ELISA KitHuman GPR152 ELISA kit

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