磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体_详细资料

产品信息

磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体标记的单克隆抗体能与具有相应抗原的细胞结合，有数百倍以上未标记的特异性抗体同时存在的条件下，则标记抗体的结合受到竞争性抑制。根据不同稀释度抗体分别与相同数量细胞结合后所测得的特异性计数值，可以计算出每个细胞表面的平均抗原密度以及抗原和抗体的亲和力

公司介绍
雅吉生物具有多年的单克隆抗体制备经验和技术积累，可提供针对不同抗原的鼠源性单克隆抗体制备服务，单抗制备的全部过程均有详细的实验记录提供给客户，提供客户订制的单抗结果包括：实验记录、杂交瘤、腹水和抗体。单抗所涵盖的抗原种类包括：多肽、可溶性蛋白、膜蛋白、磷酸化抗原、小分子抗原如抗生素、激素等。
中文名称：磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体
英文名称：AGER
浓度 1mg/1ml
规格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow
产品类型一抗
研究领域肿瘤心血管细胞生物神经生物学生长因子和激素糖尿病内分泌病
蛋白分子量 predicted molecular weight: 42kDa
性状 Lyophilized or Liquid
磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体实验方法原理：125I标记的单克隆抗体能与具有相应抗原的细胞结合，有数百倍以上未标记的特异性抗体同时存在的条件下，则标记抗体的结合受到竞争性YZ。根据不同稀释度抗体分别与相同数量细胞结合后所测得的特异性计数值，可以计算出每个细胞表面的平均抗原密度以及抗原和抗体的亲和力。
实验材料细胞McAb抗体
试剂、试剂盒结合缓冲液细胞分离液硅化油
仪器、耗材试管塑料管高速台式离机
实验步骤
1. 硅化规格相同的5 ml玻璃管，双蒸水冲净后烤干，每次实验分6～12组，每组5支试管
　　　　　　　　　　　　　　　　
2. 将125I标记抗体和非标记抗体分别用结合缓冲液作倍比稀释
　　　　　　　　　　　　　　
3. 在同一组5个试管中每管加入10 μl标记抗体，4、 5管加入10 μl未标记抗体（浓度高于同组标记抗体 100倍以上），1、2、3管补加10 μl结合缓冲液
　　　　　　　　　　　　　　　
4. 洗涤分离或培养的细胞，用结合缓冲液调整细胞浓度为5×105～1×106/80 μl，每管中加入 80 μl细胞悬液
　　　　　　　　　　　　　　　　
5. 轻轻振摇后在4 ℃条件下（冷室或冰浴上）孵育30 min
　　　　　　　　　
6. 将孵育后的细胞悬液叠加于预先置小塑料管内的200 μl分离液上
　　　　　　　　　　　　　
7. 台式高速离心机10000 g 2 min
　　　　　　　　　　　　　　　　　
8. 切下位于管底细胞小团
　　　　　　　　　　　　　　　　
9. γ计数
　
计算
　
特异性计数值＝总计数值（每组1、2、3管平均cpm值）—非特异性计数值（每组 4、5管平均cpm值）。
　　
结果用LIGAND和EBDA微机程序进行Scatchad分析，计算出细胞表面抗原密度以及抗原与抗体结合的亲和力。
注意事项
1. 每管所需要细胞数根据细胞种类而定，一般在5×105～1×106 /管，若用血小板可用1×108 /管。
　　
2. 所用McAb要求纯度好、活性高。用氯胺-T法标记抗体时，氯胺-T作用时间不要超过30 秒，比活性以3～6 μci/μg McAb为宜，标记率在50～70 ％，保持125 I标记后McAb的结合活性。
　　
3. 细胞、抗体等计数、取样要精确。
　　
4. 孵育时间和温度视竞争结合试验所用细胞和抗体的不同有所差别，可在室温或37 ℃条件下进行，孵育时间30 min～4 h不等。
　　
5. 在整个操作过程中防止未标记抗体对只加标记抗体管的污染，否则会使整个实验失败。
技术原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的GX价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术（图1）。

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