小鼠角膜上皮细胞提取物品Pai【Mouse Eye: Normal Corneal Epithelial CellsDerivatives】
小鼠角膜上皮细胞提取物是从小鼠原代角膜上皮细胞提取的，小鼠原代角膜上皮细胞从正常小鼠眼组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。 cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。 蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。 潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western ａnd Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
本公司供应的细胞，提供售前售后一条龙服务，若要获取详细的
小鼠角膜上皮细胞提取物品Pai说明书或价格信息。
小鼠角膜上皮细胞提取物品Pai培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低 1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
小鼠角膜上皮细胞提取物品Pai运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．小鼠角膜上皮细胞提取物品Pai细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。冻存培养基
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
小鼠角膜上皮细胞提取物品Pai培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低 1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)elisa试剂盒 英文名称：Rat 1,3-βD glucosidase,1,3-βD-Glu ELISA Kit规格:96T/48T人脊髓灰质炎病毒IgG(PV-IgG)ELISA Kit，48T/96T
人醇脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒英文名称：Human alcohol dehydrogenase,ADH ELISA Kit规格:96T/48T大鼠热休克蛋白27(HSP-27)ELISA Kit，48T/96T 进口/原装
人腺苷酸环化酶1(AC-1)ELISA试剂盒 英文名称：Human adenylyl cyclase 1,AC-1 ELISA Kit规格:96T/48T人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA Kit，48T/96T 特价促销
人血管紧张素Ⅱ受体Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA试剂盒英文名称：human angiotensin Ⅱ receptor type Ⅰa,AgtrⅠa ELISA Kit规格:96T/48T大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA Kit，48T/96T 进口/原装
人β内酰胺酶YZ剂(BLI)ELISA试剂盒 英文名称：Human β-Lactamase inhibitors,BLI ELISA Kit规格:96T/48T大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA Kit，48T/96T 特价促销
人迟现抗原4(VLA4)ELISA试剂盒 英文名称：Human very late appearing antigen 4,VLA4 ELISA Kit规格:96T/48T人促状腺素释放激素(TRH)ELISA Kit，48T/96T 进口/原装
人胆碱酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒 英文名称：Human choline acetylase,CHAc ELISA Kit规格:96T/48T人蛋白S(Protein S)ELISA Kit，48T/96T 特价促销
人胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒 英文名称：Human Collagenase I ELISA Kit规格:96T/48T豚鼠卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)ELISA Kit，48T/96T 进口/原装
人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒 英文名称：Human monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA Kit 规格:96T/48T鸡血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA Kit，48T/96T 进口/分装
人可溶性细胞因子受体(sCKR)ELISA试剂盒英文名称：Human soluble cytokine receptor，sCKR ELISA Kit规格:96T/48T大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA Kit，48T/96T 特价促销
小鼠角膜上皮细胞提取物品Pai人补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒 英文名称：Human complement control protein,CCP ELISA Kit规格:96T/48T人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA Kit，48T/96T特价促销
信号通路Wnt1抗体 英文名称：Wnt10.1ml
人非小细胞肺癌抗原LTA(Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen) ELISA Kit96T
Cy5标记的驴抗兔IgGDonkey Anti-rabbit IgG/Cy50.1ml
Alexa Fluor 350标记的驴抗羊IgGDonkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 3500.1ml
接头蛋白Gab 2抗体 英文名称：Gab20.1ml
Alexa Fluor 647标记的驴抗羊IgGDonkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 6470.1ml
14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亚型抗体 英文名称：14-3-3 Alpha + Beta + Gamma + Delta + Epsilon0.1ml
跨膜蛋白SEMA4G抗体 英文名称：SEMA4G0.2ml
荧光素Cy5标记牛血清白蛋白BSA/Cy50.1ml
Alexa Fluor 350标记的兔抗小鼠k链Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 3500.1ml
Cy5标记的兔抗水貂IgGRabbit Anti-Mink IgG/Cy50.1ml
