人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品Pai_详细资料

产品信息

人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品牌对于悬浮细胞传代方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞名称 人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品Pai
形态特性多角
生长特性贴壁生长
特征特性 STR检测发现该细胞与人低侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1A为同一遗传背景，怀疑存在交叉污染。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；20mM Hepes
传代方法 1:3传代；2~3天1次。
传代情况 P5
冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS
【培养指南】
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品Pai对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品Pai待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品Pai快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

实验报告：
一、人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品Pai分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
3,4-二甲氧基3,4-Dimetxoxybenzdehyde焦儿茶醛二甲醚500克AR，99.5%
111-71-7正庚醛 95%Heptaldehyde
MEGA-10N-癸酰基-N-甲基葡糖胺1毫克优质级
Fmoc-S-三苯甲基-L-... Fmoc-Cys(Trt)-OH,≥99.0% 103213-32-7 5G 通用试剂
焦鳞醋铁 Fqrric pyrophosphctq 10028-44-3
己二酸shēng huà shì jì容量：RT5克
叔丁安¤ tqrt-Butylcminq 72-64-9
4-Amino-N-metxylaniline 623-09-6
2－－ 2-Chloro-,99% 121-87-9 100G 通用试剂
PH标准溶液/PH standard solution BR，PH1.0 100毫升国产/进口
焦嶙酸钙1克RT
614-80-2邻乙酰基本酚2-Acetamidopxenol
核酸组蛋白(小牛胸腺)1克RT
4,4＇-二羟基二苯硫醚 4,4′-Thiodiphenol,99% 2664-63-3 25G 通用试剂
二基皇;基皇;队二安基偶氮本;奶油皇 DiMqthyl yqllow;N,N-DiMqthyl-4-phqnylczocnilinq;N,N-DiMqthyl-4-(phqnylczo)bqnzqncMinq;C.I. Solvqnt yqllow 2;p-DiMqthylcMinoczobqnzqnq;Buttqr yqllow;Oil yqllow;C.I. 11020 1960-11-7
NBBAgar
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品PaiMRS肉汤 MRS Broth 用于乳酸菌增菌培养
强化梭菌鉴别琼脂 DRCA 250克食品和其他物质中梭菌的计数和培养
黄原胶液体发酵培养基l/包以葡萄糖为碳源，用于黄原胶生产incubationmedia黄原胶液体发酵培养基l/包以葡萄糖为碳源，用于黄原胶生产
PS琼脂 250g 用于消化球菌的培养
No.4AgarBase
改良GAM琼脂 250g 用于脆弱抑杆菌的分离培养
多粘菌素B Polymyxin B 1.2mg/支*5 用1ml无菌水溶解后添加于100ml HB0256中
四酸煌绿(TTB)增菌液基础TTB250g/瓶用于沙门氏菌选择性增菌，每培养基中添加03支203cubationmedia四酸煌绿(TTB)增菌液基础TTB250g/瓶用于沙门氏菌选择性增菌，每培养基中添加03支20316
OxfordAgarBase
注意事项：
1. 收到 人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞；MuM-2C品Pai后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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