1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-6555α-香附酮M27590α-Cyperone≥95%
shgoy-6556β- 蜕皮甾酮M27591β-Ecdysone≥98%
shgoy-6557β,β-二甲基丙烯酰紫草素M27592β,β-dimethylacrylshikonin≥97%
shgoy-6558β-常山碱M27593β-Febrifugine97%
shgoy-6559β-倒捻子素M27594Beta-mangostin≥98%
shgoy-6560阿魏酸M27595Ferulic Acid≥98%
shgoy-6561安格洛苷CM27596Angoroside C≥98%
shgoy-6562安石榴苷M27597Punicalagin≥94%
shgoy-6563巴卡亭 IIIM27598Baccatin III≥98%
shgoy-6564巴西苏木素M27599Brazilin≥98%
shgoy-6565菝葜皂苷元/知母皂苷元M27600Sarsasapogenin≥98%
shgoy-6566白当归素M27601Byakangelicin≥98%
shgoy-6567白果内酯M27602Bilobalide≥99%
shgoy-6568白花丹醌(白花丹素)M27603plumbapin95%
shgoy-6569白花前胡丙素M27604praeruptorin C≥97%
shgoy-6570白花前胡丁素M27605Praeruptorin D≥95%
shgoy-6571白花前胡甲素M27606Praeruptorin A≥98%
shgoy-6572白花前胡素EM27607Praeruptorin E≥98%
shgoy-6573白桦酯酸/桦木酸M27608Betulinic acid≥98%
shgoy-6574白蜡树精M27609fraxinol≥97%
shgoy-6575白藜芦醇M27610Resveratrol≥98%
shgoy-6576白屈菜红碱M27611Chelerythrine ≥97%
shgoy-6577白屈菜碱M27612Chelidonine95%
Fmoc-Phe-OH抗蛋白酶
Fmoc-D-Phe-OH胆固醇酯酶(猪胰)
N-Fmoc-L-Asparagine糖化酶
Fmoc-Gln-OH乙酰辅酶A
Fmoc-Asn-OH葡萄糖氧化酶
Fmoc-D-Asn-OHD-α-氨基氧化酶
Fmoc-Gly-OHL-氨基酸氧化酶
Fmoc-lle-OH己糖激酶
Fmoc-Leu-OH胃蛋白酶(猪胃粘膜)
Fmoc-D-Leu-OH胰酶粉
Fmoc-Met-OH胰蛋白酶(牛胰)
Fmoc-D-Met-OH胰蛋白酶(猪胰)
Fmoc-Pro-OH脂肪酶(猪胰)
Fmoc-D-Pro-OH过氧化氢酶(牛肝)
Fmoc-Ser-OH溶菌酶(蛋清)
Z-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)1mg包装Fmoc-D-Ser-OH溶葡球菌酶
Fmoc-Hyp-OH氯化溶菌酶
Fmoc-Thr-OH纤维素酶(绿色木霉)
Fmoc-Trp-OH纤维素酶R-10
Fmoc-D-Trp-OH半纤维素酶
Fmoc-D-Val-OHβ-葡萄糖苷酸酶
PCPGβ-葡萄糖苷酶
DL-2-(2-Chlorophenyl)glycineα-葡萄糖苷酶
L-(+)-2-Chlorophenylglycine蛋白酶(枯草杆菌)
CBZ-CL乳酸脱氢酶(兔肌)
N-BZ-Val-Gly-Arg PNA•HC1胶原酶
D-Val-Leu-Lys PNA•2HC1透明质酸酶
Z-Gly-Pro-Arg PNA acetate salt过氧化物酶(辣根)
Z-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)1mg包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCRYZ物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。