1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-304大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA Kit,48T/96T BCDF(Human B cell differetiation factor) ELISA Kit 人B细胞分化因子
shgoy-305人单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit,48T/96T Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素7
shgoy-306小鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit,48T/96T Soybean agglutinin,SBA ELISA Kit 大豆凝集素
shgoy-307大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit,48T/96T D2D (Rabbit D-Dimer) ELISA Kit 兔子D二聚体
shgoy-308人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit,48T/96T Phaseolus vulgaris agglutinin,PHA ELISA Kit 菜豆凝集素
shgoy-309小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit,48T/96T IL-1sR I (Rabbit soluble interleukin-1 receptor I ) ELISA Kit 兔子白介素1可溶性受体I
shgoy-310大鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit,48T/96T Mouse eosinophil cationic protein,ECP ELISA Kit 小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白
shgoy-311人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit,48T/96T IL-32 ELISA Kit 大鼠白介素32
shgoy-312小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit,48T/96T Ep-CAM/CD362(Human Epithelial Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 人上皮细胞粘附分子
shgoy-313大鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit,48T/96T PROGR ELISA kit 大鼠孕酮受体
shgoy-314人巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit,48T/96T Lens culinaris agglutinin,LCA ELISA Kit 扁豆凝集素
shgoy-315小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit,48T/96T Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA Kit 小鼠Qa淋巴细胞抗原2
shgoy-316猴子巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit,48T/96T Lep IgG (Rabbit Leptospira IgG) ELISA Kit 兔钩端螺旋体IgG
shgoy-317猪巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit,48T/96T Sam(Human soluble adhesion molecules) ELISA Kit 人可溶性粘附分子
shgoy-318大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit,48T/96T AmAC-1(Human Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1) ELISA Kit 人巨噬细胞替代激活相关化学因子1
shgoy-319兔子巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit,48T/96T IL-21 ELISA Kit 大鼠白介素21
shgoy-320人巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA Kit,48T/96T Ricinus communis agglutinin,RCA ELISA Kit 蓖麻凝集素
shgoy-321小鼠巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA Kit,48T/96T Mouse D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA Kit 小鼠D-乳酸脱氢酶
shgoy-322大鼠巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA Kit,48T/96T F1+2 (Rabbit prothrombin fragment 1+2) ELISA Kit 兔凝血酶原片段F1+2
shgoy-323人巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA Kit,48T/96T ADM (Rabbit soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 兔子肾上腺髓质素
shgoy-324小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA Kit,48T/96T D-LDH ELISA Kit 大鼠D-乳酸脱氢酶
TOOS sodium salt偶氮脒类引发剂V65
TOPS sodium salt环偶氮脒类引发剂VA-044
Tracking Dye-2D环偶氮脒类引发剂VA061
Basic Blue 26环偶氮脒类引发剂V501
Yariv′s Reagent环偶氮脒类引发剂V601
Azoviolet偶氮二甲酰胺
Tropaeolin O sodium salt司盘20
Nile Red司盘40
Oxyvanadium phthalocyanine司盘60
3-Nitrophenol司盘80
Doxorubicin(Adriamycin) 阿霉素100μL包装Hydrindantin dihydrate司盘85
Direct Black 382,5-双(5-叔丁基-2-苯并恶唑基)噻吩
Fast red B salt卡特缩合剂
CFSE十六烷基二甲基苄基氯化铵
Fast red B salt 1,5-Naphthalenedisulfonate三羟甲基氨基甲烷
Hydroxynaphthol blue双[三(羟甲基)氨基甲烷]
Lignin alkalie双[三(羟甲基)氨基丙烷]
Thiazole Orange三羟甲基氨基甲烷盐酸盐
AMAC三羟甲基氨基甲烷乙酸盐
ATA三羟甲基氨基甲烷碳酸盐
Thioflavin T3-(环己氨基)-1-丙磺酸
Thioflavine S3-(环己氨基)2-羟基-1-丙磺酸
β-Naphthol Violet3-(环己氨基)2-羟基-1-丙磺酸钠盐
VC3-(环己氨基)-1-丙磺酸钠盐
Doxorubicin(Adriamycin) 阿霉素100μL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCRYZ物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。