1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1454石蜡切片组织NF KAPPA B P50蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7584210/20次
shgoy-1455 载玻片细胞NF KAPPA B P50蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7584310/20次
shgoy-1456 冰冻切片组织NF KAPPA B P50蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7584410/20次
shgoy-1457 石蜡切片组织NF KAPPA B P50蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7584510/20次
shgoy-1458 细胞NF KAPPA B P50蛋白表达比色法定量检测试剂盒M7584610/50 次
shgoy-1459 细胞NF KAPPA B P50蛋白表达荧光定量检测试剂盒M7584710/50 次
shgoy-1460 NF KAPPA B P50蛋白表达西方杂交分析试剂盒M758485次
shgoy-1461NF KAPPA B P50蛋白免疫共沉淀分析试剂盒M758495次
shgoy-1462NF KAPPA B P50蛋白表达ELISA定量检测试剂盒M7585025次
shgoy-1463 细胞RHO 蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒M7585110/20次
shgoy-1464载玻片细胞RHO 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7585210/20次
shgoy-1465冰冻切片组织RHO 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7585310/20次
shgoy-1466石蜡切片组织RHO 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7585410/20次
shgoy-1467 载玻片细胞RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7585510/20次
shgoy-1468 冰冻切片组织RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7585610/20次
shgoy-1469 石蜡切片组织RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7585710/20次
shgoy-1470 细胞RHO 蛋白表达比色法定量检测试剂盒M7585810/50 次
shgoy-1471 细胞RHO 蛋白表达荧光定量检测试剂盒M7585910/50 次
shgoy-1472 RHO 蛋白表达西方杂交分析试剂盒M758605次
shgoy-1473RHO 蛋白免疫共沉淀分析试剂盒M758615次
shgoy-1474RHO 蛋白表达ELISA定量检测试剂盒M7586225次
shgoy-1475 细胞TRAIL 蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒M7586310/20次
General12-羟基二十烷四烯酸(12-HETE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
General雌酮(E1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
General5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)高密度脂蛋白(HDL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)CD320分子(CD320)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)低密度脂蛋白受体(LDLR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)极低密度脂蛋白受体(VLDLR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Runt相关转录因子2(RUNX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)中间密度脂蛋白(IDL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)胎盘钙黏蛋白(CDHP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)α1-抗胰糜蛋白酶(α1ACT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)α2-巨球蛋白(α2M)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 离心法)1次包装Homo sapiens (Human)α-乳清蛋白(αLA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)连环蛋白β1(CTNNβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Generalβ-羟丁酸(OHβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)神经介素U(NMU)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)接触蛋白关联蛋白1(CNTNAP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)泛素激活酶样蛋白(UBE1L)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)白蛋白(ALB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)粘蛋白3(MUC3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 离心法)1次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCRYZ物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。