人淀粉样前体蛋白β C-末端片段(APPβ CTF)检测试剂实验原理:此试剂盒是一种夹心法的ELISA试剂盒,使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂,溶液所显示的颜色强度与样品中APPβ CTF的量成正比。检测范围:0.19~12pg/mL预期用途:此试剂盒用于细胞裂解液中人APPβ CTF的检测
人淀粉样前体蛋白β C-末端片段(APPβ CTF)检测试剂
(日本IBL 27776)
简介
首例阿尔茨海默病(AD)是由德国神经病理学家于1907年证实,认为是导致痴呆症的首要原因.众所周知,淀粉样蛋白β(老年斑的形成的主要组分)是由淀粉样前体蛋白(APP,共有三种亚型,APP695,APP751,APP770)经β分泌酶和γ分泌酶裂解形成的.另一方面,β分泌酶C-末端片段(β CTF)经β分泌酶裂解形成而非γ分泌酶
β CTF,Aβ,sAPPα和sAPPβ的检测在APP代谢途径研究中有着重要的意义
此试剂盒可检测细胞裂解液中人APPβ CTF
实验原理
此试剂盒是一种夹心法的elisa试剂盒,使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂,溶液所显示的颜色强度与样品中APPβ CTF的量成正比
检测范围
0.19~12pg/mL
预期用途
此试剂盒用于细胞裂解液中人APPβ CTF的检测
细胞裂解液的准备
1. 细胞培养板内加入IBL裂解液(IBL 裂解液 货号#19022)
2. 混合器上混匀
3. 2-8℃下旋转30分钟使其溶解
4. 2-8℃下10000rpm离心10min
5. 用EIA缓冲液稀释上清
试剂盒组成
1. 微孔板,96T,包被有抗人APP-C兔IgG
2. 标记抗体浓缩,30X,0.4ml,HRP标记的抗人Aβ(N)(82E1)小鼠IgG单抗
3. 标准品,0.5ml,2支,与人APPβ CTF相应的合成肽
4. EIA缓冲液,30ml,1%的BSA,含0.05%的吐温20的PBS
5. 标记抗体稀释液,12ml,1%的BSA,含0.05%的吐温20的PBS
6. 着色剂,TMB,15ml
7. 终止液,1N硫酸,12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液,40X,50ml,0.005%吐温20的磷酸缓冲液
准备步骤
试验所需材料但试剂盒未提供
1. 酶标仪(450nm)
2. 移液器和枪头
3. 有刻度的烧杯和量筒
4. 蒸馏水
5. 冰箱(4℃)
6. 坐标纸(对数-对数)
7. 吸水纸
8. 标准品稀释管
9. 洗瓶
10. 一次性试验管
试剂准备
1. 洗涤缓冲液制备:先将洗涤浓缩液平衡至室温,充分混匀,然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀,即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内,并于2周内用完
2. 标记抗体的制备:用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍,即得。
例:如果只测一条板,8孔,则需要标记抗体800ul(30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液,混匀,使用时每孔加100ul)
此步骤在实验前完成
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内,保存在4℃
3. 标准品的制备:吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内,充分混匀,得到24pmol/L的人APPβ CTF标准品
4. 标准品的稀释:准备8个试管用于标准品的稀释,每管加入230ul的EIA缓冲液