Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-Cas9-727操作步骤来源可靠(源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌),活力>95%,贴壁性好。我们从试剂、包被器皿、冻存原代细胞、新鲜原代细胞、原代细胞的分子学实验等提供全程服务。我司拥有专业的实验室,可无菌操作并提供相关科研项目解决方案以及实验服务。
细胞名称
Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-Cas9-727 操作步骤形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使SK-HEP-1细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo,经400ug/ml G418筛选得到的单克隆,经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白,可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS;400ug/ml G418
传代方法 1:2~1:6传代;2~3天换液1次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X,X;CSF1PO:11,12;D12S391:18,18;D13S317:8,12;D16S539:12,12;D18S51:13,15;D19S433:12,15.2;D21S11:29,31;D2S1338:20,20;D3S1358:16,16;D5S818:10,13;D6S1043:11,11;D7S820:8,11;D8S1179:13,14;FGA:17,17;Penta E:13,21;TH01:7,9;TPOX:9,9;vWA:14,17;
同工酶
染色体
使用权限 A类
Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-Cas9-727 操作步骤 细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-Cas9-727 操作步骤 对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-Cas9-727 操作步骤 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
冷冻保存方法一:冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。
冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
英文名称:5,7-Dihydroxy-2-isopropylchromoneCAS:96552-59-9 5,7-二羟基-2-(1-甲基乙基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C12H12O4纯度:≥95%植物来源:
英文名称:5,7-Dihydroxy-3,4',8-trimethoxyflavoneCAS:1570-09-85,7-二羟基-3,4',8-三甲氧基黄酮用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C18H16O7纯度:≥95%植物来源:
英文名称:5,7-Dihydroxy-6,8-dimethoxyflavoneCAS:3162-45-65,7-二羟基-6,8-二甲氧基黄酮用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C17H14O6纯度:≥98%植物来源:
英文名称:5,7-DihydroxychromoneCAS:31721-94-55,7-二羟基色原酮用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C9H6O4纯度:≥98%植物来源:
英文名称:5'-DemethylaquillochinCAS:305364-91-45'-去甲基沉香木质素用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C20H18O9纯度:≥95%植物来源:
M0037乳酸脱氢酶(兔肌)/ L-乳酸脱氢酶/乳酸去氢酵素/LDH/LAD/Lactic dehydrogenase(rabbit muscle),Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品Pai,9001-60-92~8℃BR,30u/mg,粉末100毫克
,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品Pai,1克
,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品Pai,BR,300u/mg,悬浮液5KU
中文名称: 乳酸脱氢酶(兔肌) ,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品Pai,25KU
其他中文名称: L-乳酸脱氢酶;乳酸去氢酵素
英文名称: LAD
其他英文名称: LDH;Lactic dehydrogenase(rabbit muscle)
产品规格: BR,300u/mg,悬浮液
包装: 100KU/25KU/5KU
产品规格: BR,30u/mg,粉末
包装: 1克/100毫克
CAS号:9001-60-9
级别:BR
分子量:约36000
活力:≥300u/mg protein
活力定义:One unit will reduce 1.0 μmole of pyruvate to L-lactate per min at pH 7.5 at 37℃
浓度:≥5000u/ml
分子量:132000
活力:≥30u/mg
Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-Cas9-727 操作步骤 性状:悬浮液,粉末。酶反应:乳酸盐+辅酶I=丙酮酸盐+还原辅酶I+H+ 。等电点pI 4.6。在25℃,pH 5.0~11.0时稳定;在pH小于5时,120分钟后没有活力(放置同样时间,在pH 5.0时有活力,在pH 6.0时有84%活力)
用途:生化研究。丙酮酸盐的检定
保存:2~8℃
Cas9稳定表达的人肝腹水腺癌细胞;SK-HEP-1-Cas9-727操作步骤 注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和公司技术部沟通交流。
6. 该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。