细胞名称 绿色荧光蛋白标记的人非小细胞肺癌细胞;NCI-H1299-EGFP图片
形态特性 上皮样;多角形
生长特性 贴壁生长
特征特性 通过慢病毒感染的方式使NCI-H1299细胞稳定表达绿色荧光蛋白EGFP,后经流式分选获得的EGFP阳性细胞群。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:2传代;3天传代一次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X,X;CSF1PO:12,12;D12S391:21,22;D13S317:12,12;D16S539:12,13;D18S51:16,16;D19S433:14,14;D21S11:32.2,32.2;D2S1338:23,24;D3S1358:17,17;D5S818:11,11;D6S1043:11,11;D7S820:10,10;D8S1179:10,13;FGA:20,20;Penta E:11,11;TH01:6,9.3;TPOX:8,8;vWA:16,18;
同工酶
染色体
使用权限 A类
绿色荧光蛋白标记的人非小细胞肺癌细胞;NCI-H1299-EGFP图片 复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过Z易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
绿色荧光蛋白标记的人非小细胞肺癌细胞;NCI-H1299-EGFP图片 操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
英文名称:3-O-Caffeoyloleanolic acidCAS:97534-10-63-O-咖啡酰基齐墩果酸用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C39H54O6纯度:≥95%植物来源:
英文名称:3-O-Caffeoylquinic acidCAS:327-97-93-O-咖啡酰奎宁酸用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C16H18O9纯度:≥98%植物来源:
英文名称:3-O-p-Coumaroyloleanolic acidCAS:151334-06-43-O-对香豆酰齐墩果酸用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C39H54O5纯度:≥95%植物来源:
英文名称:3-O-trans-p-Coumaroyltormentic acidCAS:121064-78-63-O-反式对香豆酰委陵菜酸用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C39H54O7纯度:≥97%植物来源:
英文名称:3α-Cinnamoyloxypterokaurene L3CAS:79406-13-63ALPHA-肉桂酰氧基-9BETA-羟基-等效-贝壳杉-16-烯-19-酸用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C29H36O5纯度:≥95%植物来源:
英文名称:4-Cadinen-7-olCAS:217650-27-64-杜松萜烯-7-醇用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C15H26O纯度:≥95%植物来源:
英文名称:4'-O-trans-p-CoumaroylmussaenosideCAS:1246012-27-04'-O-反式对香豆酰玉叶金花甙酸甲酯用途:本品用于含量测定,药理科研。包装内附产品质量检测及鉴定报告,因为品质是企业的决战场,是基业长青的保证,我公司提供的一切产品仅供科研,实验室用,不得用于注射,食用或者其他用途。公式:C26H32O12纯度:≥95%植物来源:
25316-40-92~8℃K0105盐酸阿霉素/盐酸多柔比星/盐酸柔红霉素/阿得里亚霉素/14-羟正定霉素/阿霉素/阿得里亚霉素/DOXUSP级,98%25毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品Pai,
中文名称: 盐酸阿霉素
其他中文名称: 盐酸多柔比星;盐酸柔红霉素;阿得里亚霉素;14-羟正定霉素;阿霉素;阿得里亚霉素
英文名称: DOX
其他英文名称: Doxorubicin hydrochloride ;Adriamycin hydrochloride; Hydroxydaunorubicin hydrochloride
产品规格: USP级,98%
包装:25毫克
CAS号:25316-40-9
C27H29NO11·HC1=579.98
级别:USP级
含量:≥98.0%
绿色荧光蛋白标记的人非小细胞肺癌细胞;NCI-H1299-EGFP图片熔点:198~203℃
性状:橙色或桔红色结晶粉末,溶于水、DMSO、四氢呋喃和醇,不溶于丙酮、苯、。水中溶解度:10mg/ml, 水溶液为橙红色透明溶液。比旋光度248°。
用途:生化研究。反相转录酶和RNA聚合酶的YZ剂,免疫YZ剂;可插入DNA链中
保存:2~8℃
绿色荧光蛋白标记的人非小细胞肺癌细胞;NCI-H1299-EGFP图片培养温馨提示:
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