1. 组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复苏到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再 用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
微型离心管专用研磨杵 ( 有离心管 ) 50 套特价操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
19908-48-6HPLC≥98%,20mg/支高丽槐素; 马卡因Gao Lihuai; maackiain
18797-79-0HPLC≥98%,20mg/支紫蓳灵; 紫堇醇灵碱Purple Jin Ling; Corydalis alcohol spirit alkali
55033-90-4HPLC≥98%,20mg/支异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷; 异鼠李素Isorhamnetin -3-O- new orange peel glucoside; isorhamnetin
80681-44-3HPLC≥98%,20mg/支亥茅酚苷Hai Mao phenolic glycosides
56-69-9; 4350-09-8HPLC≥98%,20mg/支5-羟色胺酸; 5-羟基色氨酸5- hydroxytryptamine acid 5-hydroxytryptophan; 5-
528-58-5HPLC≥94%,5mg/支氯化矢车菊素; 花青素Cyanidin chloride; anthocyanin
7084-24-4HPLC≥98%,20mg/支矢车菊素-3-O-葡萄糖苷; 花青素Cyanidin -3-O- glucoside; anthocyanin
484-20-8HPLC≥98%,20mg/支左旋肉碱L-carnitine
484-20-8HPLC≥98%,20mg/支佛手柑内酯;香柑内酯;5-甲氧基补骨脂素Bert Orangene; bergapten; 5- methoxy psoralen
28095-18-3HPLC≥98%,20mg/支白花前胡醇White Qian Hu Chun
298-81-7HPLC≥98%,20mg/支花椒毒素; 8-甲氧基补骨脂素; 花椒毒Xanthotoxin; 8- methoxy psoralen; Pepper Virus
465-99-6HPLC≥98%,20mg/支常春藤皂苷元; 常春藤皂甙元Ivy hederagenin; Zao Daiyuan
10284-63-6HPLC≥95%,20mg/支D-松醇D- pine