microRNA过表达
服务简介:
miRNA是一种21-25nt长的单链小分子RNA, 是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成,miRNA具有高度的保守性、时序性和组织特异性.而且这种特异 性和时序性,决定了组织和细胞的功能特异性,表明miRNA在细胞生长和发育过程的调节过程中起多种作用,因此miRNA的研究受到了生物学家的广泛关 注。
服务流程:
1、慢病毒过表达质粒载体的构建
设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,PCR(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(CDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。
2、慢病毒干扰质粒载体的构建
合成miRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体
3、慢病毒载体的包装与浓缩纯化
制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒,三种质粒载体分别进行高纯度无内抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养24和48h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
客户提供:
1、目的基因的序列信息;
2、病毒载体要求及选择。
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
【本公司合作项目】
慢病毒,腺病毒,RNAi类,分子生物实验,病理实验,免疫学实验,细胞实验,动物实验,蛋白组学实验等,能够进行药效学评价、毒理学评价、细胞药筛、动物建模、病理检测、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析服务!
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