山羊促卵泡生成素(FSH)ELISA试剂盒公司现货报价实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。
山羊促卵泡生成素(FSH)elisa试剂盒公司现货报价实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
ELISA试剂盒检测程序
建立标准曲线:设标准孔8孔,每孔中各加入样品稀释液100ul,孔加标准品100ul,混匀后用加样器吸出100ul,移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔,,从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照,第八孔为零孔。
加样:待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 ℃ 120分钟。
洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
每孔(除零孔)加抗体工作液50ul,置37℃ 60分钟。
洗板:同前。
每孔(除零孔)加酶标抗体工作液100ul(两滴),将反应板置37 ℃ 60分钟。
洗板:同前。
每孔加入底物液A、B各一滴,置37 ℃避光反应15分钟。
每孔加入1滴终止液混匀。
山羊促卵泡生成素(FSH)ELISA试剂盒公司现货报价应用
1.免疫酶染色各种细胞内成分的定位。
2.研究抗酶抗体的合成。
3.显现微量的免疫沉淀反应。
4.定量检测体液中抗原或抗体成分。
ELISA试剂盒性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
山羊促卵泡生成素(FSH)ELISA试剂盒公司现货报价中的洗涤
洗涤是ELISA实验中是Z多次数的操作,也是非常重要的步骤。不严格的洗涤容易出现洗不干净或交叉污染现象,实验重复效果差的现象。不管用多道加样器、洗瓶、吸管,还是洗板机,严格按照说明书操作不要减少步骤洗涤的洗涤体积、洗涤时间和洗涤次数。注意标准化操作将减少实验误差和不同实验之间的误差。操作者常出现洗板不干净现象,请比照操作:
a)洗液不要溢出孔外,以免污染相邻的孔,特别是每次洗板的前两遍,若高浓度的孔污染了低浓度的孔或空白孔,其造成的交叉污染的孔是洗不掉的,背景肯定会ZG。
b)特别注意:设计实验的时候要考虑实验孔的位置,保证甩掉洗液时,空白孔、低浓度孔或阴性对照组在上面或一侧或分开Z好。同时注意甩掉洗液的动作翻转(从正上方旋转120-150度)要迅速、干脆。甩板不要手腕左右摇摆、旋转来甩液体!甩出后以直线方式补2-3次甩出液体。
c)用干净的滤纸,不要用卫生纸,因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底,导致洗板不干净,结果偏高或偏低,重复孔的数值也会相差很大。
d)每次拍板不要重复在一个地方拍,特别是洗去酶的步骤;拍板不宜过轻,否则拍不干净,拍板很用力不会对蛋白有什么影响。但注意不要太重,以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下,一次一定要扣干净。
e)不能减少洗液体积、洗板时间和次数。洗板时间太短,洗板效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。
检测范围和保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃
2.有效期:6个月
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
山羊促卵泡生成素(FSH)ELISA试剂盒公司现货报价操作注意事项:
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
9)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
10)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
11)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
检测范围:1ng/L -30ng/L
常见问题
问:那我们算出来的ACH含量为什么出现负值?
答:说明个别样本的浓度很低,当浓度接近第6个点的时候 直线方程就有可能计算出负值
问:一个孔需要多少量的血清?
答:一个孔上样量10-50微升。
问:那标准品出现跳孔是怎么回事?
答:你完全可以拿同样的标准品再重新做一次 ,做之前摇匀一下,肯定可以做好 。那是操作问题了 ,你可以再做一次的,之前也有客户出现过类似的问题 学生做了2次都没做好 后来老师自己做 就是摇匀了一下,其他操作都一样 标准曲线做的很。
问:建议标准做复吗?
答:标准品做复孔是Z好的
问:36个样品,定96T的,可以测一个重复吧
答:可以
问:Elisa方法的不测人血小板第四因子里IgG抗体的滴度吗?
答:Elisa不测滴度的,荧光法可以测
问:酶标板不平,影响结果吗。
答:不影响结果的。
问:样本稀释液可以用来直接稀释血清吗?
答:可以的,直接加40ul就可以了
问:那我们算出来的ACH含量为什么出现负值?
答:说明个别样本的浓度很低,当浓度接近第6个点的时候 直线方程就有可能计算出负值
问:一个孔需要多少量的血清?
答:一个孔上样量10-50微升。
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