产品简介
产品名称 活化白细胞粘附分子抗体
缩 写 ALCAM
蛋 白 名 CD166 antigen
别 称 MEMD CD166
规 格 0.2ml
来 源 小鼠
特 异 性 抗人
分 子 量 65.1kDa
克隆类型 单克隆抗体IgG1;克隆号5B3
应 用 IH(P)免疫组化(石蜡);WB免疫印迹;ELISA
成 分 Purified antibody in PBS with 0.05% sodium azide and 0.5% protein stabilizer
免 疫 原 Purified recombinant fragment of human AlCAM (AA: 405-524) expressed in E. Coli.
保存条件 连续使用时4°C存储,保质期六个月;长期存储时建议分装为10ul以上小包装-20°C存储,并避免反复冻融,保质期一年。
背景资料 This gene encodes activated leukocyte cell adhesion molecule (ALCAM), also known as CD166 (cluster of differentiation 166), which is a member of a subfamily of immunoglobulin receptors with five immunoglobulin-like domains (VVC2C2C2) in the extracellular domain. This protein binds to T-cell differentiation antigene CD6, and is implicated in the processes of cell adhesion and migration. Multiple alternatively spliced transcript variants encoding different isoforms have been found
抗体:是高等动物在抗原物质的刺激下由浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗体通常存在于血清和淋巴(组织液)中。
单克隆及多克隆抗体:由单一克隆的细胞(通常是单一克隆的杂交瘤细胞)所产生的识别某一抗原表位的单一抗体;多克隆抗体是由多种细胞分别接触相应抗原而产生的多种抗体的总和,多克隆抗体识别抗原的多个表位。
抗体结构:抗体是由四条肽链构成的“Y”形对称的分子,包括两条重链和两条轻链。在“Y”的部位的氨基酸顺序在不同的抗体分子中差别很大,是负责与抗原进行特异性结合的区域,称为可变区,余下的区域则称为恒定区。
选择要点
如何选择二抗
通常情况下,某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择,如何能选择到Z适合该实验的二抗,需要综合以下几个方面进行考虑:
一抗的物种来源
一抗是在什么物种来源的,相应的二抗也要是抗该物种的抗体。例如,如果一抗是在小鼠体内制备的,那么你就应当选择抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔体内制备的,那么二抗就应当是抗兔的抗体。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。
一抗是属于哪个类或亚类
二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。
单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗体。
如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。
如果你不知道一抗是哪一类别或亚类,那么抗小鼠IgG是一个不错的选择,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。
工作原理
抗体原理
(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用。
(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。
(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,参与免疫应答。
(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化。
(7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应
①调理作用
IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization)。
②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。
储存方式
活化白细胞粘附分子抗体的保存建议
抗体保存得当与否直接决定了抗体的活性和使用效果。如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。请按照说明书或者抗体标签上推荐的保存条件正确保存抗体!无论是保存还是运输,避免反复冻融抗体!
1.拿到抗体后请务必在1000-3000转离心1-2分钟后再打开管盖进行分装和保存!(由于运输过程中反复颠簸,管内微量抗体容易聚集在管盖处,一旦直接打开容易流失抗体。请放心博士德抗体出厂时保证已装入足量。)
2.对于博士德大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃冰箱。
◇分装可以程度降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了多次从同一管中吸取抗体造成污染的可能性。
◇分装的量以一次实验用完为好,但建议Z少不要少于10μL每份。分装体积越小,抗体浓度可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响,同时分装次数越多移液吸头吸附的抗体也越多,可能会误认为抗体没有足量装入。(Z好用无菌的进口0.2ML离心管来分装抗体,国产的小管一般没有经过很好的硅化处理,容易吸附抗体蛋白,影响抗体活性。)
◇分装时请将无菌的微量移液器吸头先插入管底部反复吹打几次后再吸出抗体,以便抗体有效成分与抗体保护剂充分混匀。
◇复融后的分装抗体如果一次用不完,请将剩余母液保存在4℃冰箱,避免再冻起来!
◇避免将抗体保存在自动除霜冰箱的冷藏室中。尽量将抗体保存在手动除霜冰箱里面,而不是在冰箱门上。
3.大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是基本没有影响的。如果抗体很快(1-2周内)就能使用完,推荐在4℃保存,避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则分装后-20℃保存。
4.即用型抗体请务必保存在4℃冰箱,一定不能冷冻保存。
5.特殊抗体的保存:
◇酶联抗体:一般保存在4℃,尽量避免冷冻起来。否则可能会导致酶活力的下降或者丧失。
◇偶联抗体:所有偶联抗体需要4℃避光保存。尤其是荧光标记抗体,对光极为敏感,因此所有实验阶段也是要避光操作的。
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