高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）ELISA试剂盒公司说明书

高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）ELISA试剂盒公司说明书简介酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbent assay简称ELISA)是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗原（抗体），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）-待测抗体（抗原）-酶标记抗体的复合物

​一、高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）elisa试剂盒公司说明书简介

酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbent assay简称ELISA)是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。

ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗原（抗体），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）-待测抗体（抗原）-酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。

 

二、ELISA法的应用

1.免疫酶染色各种细胞内成分的定位。

2.研究抗酶抗体的合成。

3.显现微量的免疫沉淀反应。

4.定量检测体液中抗原或抗体成分。

 

三、高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）ELISA试剂盒公司说明书试剂盒组成
1. 微孔板 (固相抗体)96 well
2. 标记抗体 (30倍浓缩，HRP标记抗体)0.4 ml
3. 标准品    0.5 ml × 2
4. EIA缓冲液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)    30 ml
5. 标记抗体稀释液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)   12 ml
6. 显色液 (TMB底物液)15 ml
7. 终止液 (1N硫酸)12 ml
8. 洗涤缓冲浓缩液 (40倍浓缩，0.05% Tween-20的磷酸缓冲液)50 ml

四、标本的收集和保存
1.要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。
2.样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。
3.冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。
4.标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。

五、高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）ELISA试剂盒公司说明书标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

六、样本处理及要求

 

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

七、高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）ELISA试剂盒公司说明书操作技术流程 
用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
 
八、计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

九、检测范围和保存条件及有效期             
1ng/L -30ng/L
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
 

十、高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）ELISA试剂盒公司说明书性能

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

 
十一、关于我们
我们拥有专业的客服团队提供Z贴心的优质服务，以客户为ZX时间解决客户关于高灵敏小鼠单克隆抗体亚型鉴定（MAI）ELISA试剂盒公司说明书的问题。我们与南京各大高校均有合作，提供专业免费代测和技术外包服务。
公司文化
企业精神：锐意创新、追求
企业价值观：诚信、专业、严谨、优质、GX
企业用人理念：任人唯贤、唯才是用、团队至上
我们位于六朝古都江苏省南京市白下高新技术产业园，是一家专业从事“自主产品研发生产、技术服 务、知名品Pai代理”的高新技术生物公司。以为生命科学工作者提供全方位高水平的产品及技术服务为经营宗旨，有别于众多国内企业单纯代理贸易的简单运营模式，强调高端技术的掌握和优化、自主产品的研发和生产，强调良好的售后服务和技术支持，努力打造ZG乃至知名品Pai。公司拥有高水平的技术研发团队，建立多种技术平台，产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学、药学等领域。公司拥有高水平的博士技术研发团队，多名技术骨干具有国外学习经历或跨国。公司同时聘请南京大学、东南大学、ZG药科大学、南京中医药大学等高校ZD实验室学科带头人担任公司技术顾问。
 
十二、ELISA试剂盒常见问题
问：比如说我偶然发现只加样本稀释液的也出现浅黄色，这怎么解释呢？
答：可能的原因：
1、洗板时有交叉感染   
2、样本稀释液中本身有本底的一个较小的读数。也是ELISA的一个局限性，免疫的很多反应稀释液 洗涤液发挥了很重要的作用，不加的话效果不明显，但是加了以后有些成分可能有一部分的干扰作用。可以比较不同的厂家的盒子 都存在这些局限性的，但不影响的结果。ELISA严格的说就是一个半定量的方法。
问：特殊稀释液是做什么的？
答：一般情况都不要用的，他的的用途就是稀释标准品。但是,现在标准品已经稀释好了所以不需要用了。如果你需要更多的标准品，可以用他来稀释。

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