小鼠毒性休克综合征毒素1(TSST-1)性能稳定公司

二ELISA试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
 
三试剂盒组成
1. 微孔板 (固相抗体)     96 well
2. 标记抗体 (30倍浓缩，HRP标记抗体)   0.4 ml
3. 标准品  0.5 ml × 2
4. EIA缓冲液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)  30 ml
5. 标记抗体稀释液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)  12 ml
6. 显色液 (TMB底物液)   15 ml
7. 终止液 (1N硫酸)  12 ml
8. 洗涤缓冲浓缩液 (40倍浓缩，0.05% Tween-20的磷酸缓冲液) 50 ml

四ELISA操作中的洗涤
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相邻的孔，特别是每次洗板的前两遍，若高浓度的孔污染了低浓度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定会ZG。 
b)特别注意：设计实验的时候要考虑实验孔的位置，保证甩掉洗液时，空白孔、低浓度孔或阴性对照组在上面或一侧或分开Z好。同时注意甩掉洗液的动作翻转（从正上方旋转120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右摇摆、旋转来甩液体！甩出后以直线方式补2－3次甩出液体。 
c)用干净的滤纸，不要用卫生纸，因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底，导致洗板不干净，结果偏高或偏低，重复孔的数值也会相差很大。
d)每次拍板不要重复在一个地方拍，特别是洗去酶的步骤；拍板不宜过轻，否则拍不干净，拍板很用力不会对蛋白有什么影响。但注意不要太重，以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下，一次一定要扣干净。
e)不能减少洗液体积、洗板时间和次数。洗板时间太短，洗板效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。

五小鼠毒性休克综合征毒素1(TSST-1)性能稳定公司检测程序
1.建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100ul，孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔，，从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照，第八孔为零孔。
2.加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3.将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
4.洗板：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5.每孔（除零孔）加抗体工作液50ul，置37℃ 60分钟。
6.洗板：操作同4。
7.每孔（除零孔）加酶标抗体工作液100ul（两滴），将反应板置37 oC 60分钟。
8.洗板：同前。
9.每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反应15分钟。
10.终止：每孔加入1滴终止液混匀。
11.测定：在450nm处测吸光值。 

六小鼠毒性休克综合征毒素1(TSST-1)性能稳定公司的应用
1.免疫酶染色各种细胞内成分的定位。
2.研究抗酶抗体的合成。
3.显现微量的免疫沉淀反应。
4.定量检测体液中抗原或抗体成分。
 
七操作过程中的提示
⑴ 严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30～60min。
⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
(3)封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板”的出现。
(4)用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后Z好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干：还要防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
(5)合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。
(6)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
(7)显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
(8)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
(9)应保证C清洁，整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。


八小鼠毒性休克综合征毒素1(TSST-1)性能稳定公司样本处理
在收集标本前需有一个完整的计划，需要清楚要检测的成份是否足够稳定。ELISA检测提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。
 
九计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
 
十小鼠毒性休克综合征毒素1(TSST-1)性能稳定公司常见问题 
Q正确的收集或保存是什么
A确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完全，充分混合并在一定的期限内使用。
Q如何正确的样本制备
A说明书中样本制备方法已经过性能测试验证，严格按照说明书推荐进行样本制备。确保使用正确的校正稀释液。
Q工作台温度不均衡怎么办
A避免在环境条件变化的位置孵育 96 孔板（如放置在通风处或窗台边）。
Q如何防止体系液体蒸发
A保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。使用同一种移液器吸取方式。
Q 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ？
A要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后：板条和板架都是可拆卸的，可以再用之，前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。
 
十一关于我们
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