人细胞间黏附分子1(ICAM-1)试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。人肝素结合性表皮生长因子HB-EGF由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
一人细胞间黏附分子1(ICAM-1)ELISA试剂盒质量好价格低工作原理试剂盒采用双抗体夹心法,使用了两种高特异性的抗体测定靶蛋白,以TMB作为显色剂,显色的强度与样本中靶蛋白的量成正比。
二、试剂盒组成
1. 微孔板 (固相抗体) 96 well
2. 标记抗体 (30倍浓缩,HRP标记抗体) 0.4 ml
3. 标准品 0.5 ml × 2
4. EIA缓冲液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS) 30 ml
5. 标记抗体稀释液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS) 12 ml
6. 显色液 (TMB底物液) 15 ml
7. 终止液 (1N硫酸) 12 ml
8. 洗涤缓冲浓缩液 (40倍浓缩,0.05% Tween-20的磷酸缓冲液) 50 ml
三人细胞间黏附分子1(ICAM-1)ELISA试剂盒质量好价格低操作流程
1.建立标准曲线:设标准孔8孔,每孔中各加入样品稀释液100ul,孔加标准品100ul,混匀后用加样器吸出100ul,移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔,,从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照,第八孔为零孔。
2.加样:待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3.将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
4.洗板:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
5.每孔(除零孔)加抗体工作液50ul,置37℃ 60分钟。
6.洗板:操作同4。
7.每孔(除零孔)加酶标抗体工作液100ul(两滴),将反应板置37 oC 60分钟。
8.洗板:同前。
9.每孔加入底物液A、B各一滴,置37 oC避光反应15分钟。
10.终止:每孔加入1滴终止液混匀。
11.测定:在450nm处测吸光值。
四人细胞间黏附分子1(ICAM-1)ELISA试剂盒质量好价格低的应用
1.免疫酶染色各种细胞内成分的定位。
2.研究抗酶抗体的合成。
3.显现微量的免疫沉淀反应。
4.定量检测体液中抗原或抗体成分。
五技术原理
试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。人肝素结合性表皮生长因子HB-EGF由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术
六人细胞间黏附分子1(ICAM-1)ELISA试剂盒质量好价格低样本处理
在收集标本前需有一个完整的计划,需要清楚要检测的成份是否足够稳定。ELISA检测提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。
七计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
八人细胞间黏附分子1(ICAM-1)ELISA试剂盒质量好价格低常见问题
Q正确的收集或保存是什么
A确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉,用相应缓冲液重悬完全,充分混合并在一定的期限内使用。
Q如何正确的样本制备
A说明书中样本制备方法已经过性能测试验证,严格按照说明书推荐进行样本制备。确保使用正确的校正稀释液。
Q工作台温度不均衡怎么办
A避免在环境条件变化的位置孵育 96 孔板(如放置在通风处或窗台边)。
Q如何防止体系液体蒸发
A保证移液器正常工作,必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。使用同一种移液器吸取方式。
Q 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ?
A要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后:板条和板架都是可拆卸的,可以再用之,前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子,放到冰箱 2-8度保存。
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