人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒生产商实验步骤1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。3、加酶标抗体:在各反
一、人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒生产商ELISA简介
酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbent assay简称ELISA)是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。 ELISA过程包括抗原(抗体)吸附在固相载体上称为包被,加待测抗原(抗体),再加相应酶标记抗体(抗原),生成抗原(抗体)-待测抗体(抗原)-酶标记抗体的复合物,再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体(抗原)的量。待测抗体(抗原)的定量与有色产生成正比。
二、ELISA法的应用
1.免疫酶染色各种细胞内成分的定位。
2.研究抗酶抗体的合成。
3.显现微量的免疫沉淀反应。
4.定量检测体液中抗原或抗体成分。
三、人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)elisa试剂盒生产商实验步骤
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:在各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4、加底物液显色:在各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:在每孔中加入1滴终止液混匀
6、结果判定:在450mm处测光值,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
四、人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒生产商技术原理
试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。人肝素结合性表皮生长因子HB-EGF由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术
五、人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒生产商计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
六、人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒生产商的常见问题
问: 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ?
答:要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后:板条和板架都是可拆卸的,可以再用之,前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子,放到冰箱 2-8度保存。
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