小鼠脑皮质神经元

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代,再培养，传代培养也是一种将细胞保存下去的方法，同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程，悬浮型细胞直接分瓶就可以而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

小鼠脑皮质神经元建立和培养简介：

创建的4因子转录法进行细胞制作，原料为末梢血单核细胞，采样简单。如使用新鲜单核细胞，2周后可获得细胞克隆体（图1），4周内便可以制作出初代细胞（图2）。在培养方面，使用无滋养层培养法对细胞进行增殖培养，可在每周获得2-3倍的细胞（图3，图4）。在细胞状态稳定后，进行免疫染色测试，对细胞的未分化状态进行确定，分别对细胞进行膜染色（图5）及核染色（图6），由此得到高质量的细胞。                        

小鼠脑皮质神经元主要服务：

1）细胞基础培养（有滋养层or无滋养层）

2）细胞增殖及冷冻保存

3）基础培养技术实习

4）新药及实验仪器上市前评估

小鼠脑皮质神经元培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？

                              原            因：

黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基

1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；

2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能

  a、是“黑胶虫”，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随小鼠脑皮质神经元传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。以前（这个至少是10年以前），很多实验室在养细胞时用国产血清，那时的血清可能质量不过关，有所谓的“黑胶虫”，但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清，即使国产的，产品里这种现象就少见了。

 b、是细胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗运动。

 c、是核糖体，也可能是杂质

 骨骼肌细胞5x105

骨骼肌成纤维细胞5x105

纤维环细胞5x105

髓核细胞5x105

破骨细胞5x105

皮肤成纤维细胞5x105

表皮角化细胞5x105

表皮干细胞5x105

前脂肪细胞5x105

脂肪微血管内皮细胞5x105

毛乳头细胞5x105

外根鞘细胞5x105

毛囊角质细胞5x105

间充质干细胞培养5x105

B淋巴细胞5x105

T淋巴细胞5x105

单核细胞5x105

DC细胞5x105

造血干细胞5x105

NK细胞5x105

内皮祖细胞5x105

胸腺上皮细胞5x105

胸腺成纤维细胞5x105