L-M细胞,鼠结缔组织细胞胸苷激酶变异株

L-M细胞,鼠结缔组织细胞胸苷激酶变异株来源有保障（世界品Pai），状态且传代次数好，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。每管含有细胞数>5×100000cells/ml，具有高品质、高纯度、高稳定性等特点，专利纯化技术保证产品性能。

细胞纯度：95%。

细胞来源：ATCC等。

包装：内层无菌自封袋，专用防压泡沫盒，外层防压保温气泡袋，说明书。

细胞冻存：液氮冻存。

用途：提供用于科研的稳定细胞系。

运输方式：快递干冰运输或活细胞运输（T-25 flasks）。 

L-M细胞,鼠结缔组织细胞胸苷激酶变异株注意事项

1.原代培养，一定要避免污染。

2.MEF生存能力有限，如果不冻存，体外存活十代左右。

3.冻存后复苏的细胞只能传代一次，因为这些细胞繁殖能力有限。

4.消化细胞时间不要过长。

L-M细胞,鼠结缔组织细胞胸苷激酶变异株传代时消化的问题。

可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。

很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。

在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。。。呵呵。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）

L-M细胞,鼠结缔组织细胞胸苷激酶变异株具体操作：

1）.首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。

2）.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）

3）.吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净头里备用，L-M细胞,鼠结缔组织细胞胸苷激酶变异株加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。

4）.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。

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