人阿立新A（Orexin A）ELISA试剂盒文献支持完全售后

人阿立新A（Orexin A）ELISA试剂盒文献支持完全售后ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来，得到全世界科研工作者的认可及推崇，在欧美及ZG获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。ELISA生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

安全性：
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取ELISA试剂盒里的任何成份。

ELISA试剂盒组成
1. 微孔板 (固相抗体)     96 well
2. 标记抗体 (30倍浓缩，HRP标记抗体)   0.4 ml
3. 标准品  0.5 ml × 2
4. EIA缓冲液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)  30 ml
5. 标记抗体稀释液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)  12 ml
6. 显色液 (TMB底物液)   15 ml
7. 终止液 (1N硫酸)  12 ml
8. 洗涤缓冲浓缩液 (40倍浓缩，0.05% Tween-20的磷酸缓冲液) 50 ml

人阿立新A（Orexin A）ELISA试剂盒文献支持完全售后特点

一、GX、灵敏、特异的抗体；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、节省实验经费。

ELISA试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。

检测程序
1.建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100ul，孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔，，从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照，第八孔为零孔。
2.加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3.将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
4.洗板：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5.每孔（除零孔）加抗体工作液50ul，置37℃ 60分钟。
6.洗板：操作同4。
7.每孔（除零孔）加酶标抗体工作液100ul（两滴），将反应板置37 oC 60分钟。
8.洗板：同前。
9.每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反应15分钟。
10.终止：每孔加入1滴终止液混匀。
11.测定：在450nm处测吸光值。 

应用
1.免疫酶染色各种细胞内成分的定位。
2.研究抗酶抗体的合成。
3.显现微量的免疫沉淀反应。
4.定量检测体液中抗原或抗体成分。

ELISA试剂盒性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%

人阿立新A（Orexin A）ELISA试剂盒文献支持完全售后中的洗涤
洗涤是ELISA实验中是Z多次数的操作，也是非常重要的步骤。不严格的洗涤容易出现洗不干净或交叉污染现象，实验重复效果差的现象。不管用多道加样器、洗瓶、吸管，还是洗板机，严格按照说明书操作不要减少步骤洗涤的洗涤体积、洗涤时间和洗涤次数。注意标准化操作将减少实验误差和不同实验之间的误差。操作者常出现洗板不干净现象，请比照操作： 
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相邻的孔，特别是每次洗板的前两遍，若高浓度的孔污染了低浓度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定会ZG。 
b)特别注意：设计实验的时候要考虑实验孔的位置，保证甩掉洗液时，空白孔、低浓度孔或阴性对照组在上面或一侧或分开Z好。同时注意甩掉洗液的动作翻转（从正上方旋转120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右摇摆、旋转来甩液体！甩出后以直线方式补2－3次甩出液体。  
c)用干净的滤纸，不要用卫生纸，因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底，导致洗板不干净，结果偏高或偏低，重复孔的数值也会相差很大。
d)每次拍板不要重复在一个地方拍，特别是洗去酶的步骤；拍板不宜过轻，否则拍不干净，拍板很用力不会对蛋白有什么影响。但注意不要太重，以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下，一次一定要扣干净。
e)不能减少洗液体积、洗板时间和次数。洗板时间太短，洗板效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。

检测范围和保存条件及有效期              
1.试剂盒保存：2-8℃
2．有效期：6个月

组成结构

1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测
　　试剂盒成分
　　1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
　　2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
　　3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2 
　　4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
　　5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
　　6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
　　7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1
　　8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)

计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
 
人阿立新A（Orexin A）ELISA试剂盒文献支持完全售后操作注意事项：
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
9）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
10）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
11）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
 检测范围：1ng/L -30ng/L
 
ELISA试剂盒小问题回答
问：那我们算出来的ACH含量为什么出现负值？
答：说明个别样本的浓度很低，当浓度接近第6个点的时候  直线方程就有可能计算出负值
问：一个孔需要多少量的血清？
答：一个孔上样量10-50微升。

问：那标准品出现跳孔是怎么回事？
答：你完全可以拿同样的标准品再重新做一次 ，做之前摇匀一下，肯定可以做好 。那是操作问题了 ，你可以再做一次的，之前也有客户出现过类似的问题 学生做了2次都没做好 后来老师自己做 就是摇匀了一下，其他操作都一样 标准曲线做的很。
问：建议标准做复吗？
答：标准品做复孔是Z好的
问：36个样品，定96T的，可以测一个重复吧
答：可以

问：ELISA方法的不测人血小板第四因子里IgG抗体的滴度吗？
答：ELISA不测滴度的，荧光法可以测
问：酶标板不平，影响结果吗。
答：不影响结果的。
问：样本稀释液可以用来直接稀释血清吗？
答：可以的，直接加40ul就可以了
 问：那我们算出来的ACH含量为什么出现负值？
答：说明个别样本的浓度很低，当浓度接近第6个点的时候  直线方程就有可能计算出负值
问：一个孔需要多少量的血清？
答：一个孔上样量10-50微升。

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