现货Qiagen EndoFree Plasmid Buffer Set 价格_详细资料

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现货Qiagen EndoFree Plasmid Buffer Set 价格
EndoFree Plasmid Buffer Set
用于制备10次Mega规模或5次Giga规模超转染级别纯度的质粒或柯斯质粒DNA

纯化得到的DNA内毒素低于0.1 EU/µg

纯化流程快，同时去除内毒素

获得高产量的高拷贝质粒DNA

使用LyseBlue，获得的裂解和高产量的DNA
配套QIAGEN-tips使用的EndoFree Plasmid Buffer Set利用阴离子交换技术，可快速制备无内毒素（<0.1 EU/µg DNA）质粒DNA。QIAfilter Cartridges通过过滤快速澄清裂解液，DNA产量500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）或10 mg（Giga）。纯化的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得的DNA纯度，非常适合超转染级纯的应用。

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QIAGEN Plasmid Kit实验流程。

性能
EndoFree Plasmid Buffer Set将GX的内毒素去除步骤整合到质粒纯化过程中，不需要额外步骤，也不需使用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Cartridge过滤细菌裂解液，通过重力流QIAGEN-tip阴离子交换技术纯化质粒DNA。
EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素，内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染（参见Plasmid purification method versus transfection efficiency和Plasmid purity versus transfection efficiency及表"Endotoxin levels in plasmid preparations"和"EndoFree DNA yields high transfection efficiencies with primary cells"）。QIAGEN超纯无内毒素DNA也适合基因ZL研究和其他敏感应用。
质粒制备中的内毒素水平*

质粒制备方法内毒素（EU^†/µg DNA）平均转染率^‡

EndoFree Plasmid Kit 0.1 154%

QIAGEN Plasmid Kit 9.3

2x CsCl 2.6 99%

Silica-gel slurry 1230.0 24%

* 宿主菌：大肠杆菌DH5α 质粒：pRSVcat.
^†1 ng LPS = 1.8 EU.
^‡ 根据表中的数据计算 Plasmid purification method versus transfection efficiency.
无内毒素DNA配合原代细胞得到高转染率*

DNA纯化方法细胞转染百分比

EndoFree Plasmid Kit 21.0% ± 0.93

QIAGEN Plasmid Kit 8.1% ± 0.57

Silica-gel slurry 5.2% ± 0.74

* 原代兔胃壁细胞转染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制备。使用Effectene Transfection Reagent进行转染。该数据是细胞表达GFP的百分率，由转染48小时后绿色荧光细胞数量确定。转染效率是每种纯化方法制备的超过2个不同的DNA中6–9个复制样本的平均值。（数据由C. Chew ａnd J. Parente友情提供，Department of Molecular Medicine ａnd Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理
纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法（参见"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤，获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。
QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置，用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可完全去除SDS沉淀，清除细菌裂解液，相比离心可大量节约时间，减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Cartridges（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）可轻松有效的澄清细菌裂解液。
QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）专为核酸纯化而开发。它的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装QIAGEN-tips，限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质，如苯酚，氯仿，溴化乙锭和CsCl，限度地减少对用户和环境的危害。
内毒素，又称脂多糖或LPS，是革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分，如大肠杆菌（参见Bacterial cell wall）。内毒素在质粒裂解纯化过程中释放，并显著地降低对内毒素敏感的细胞株的转染效率（参见Plasmid purification method versus transfection efficiency和Plasmid purity versus transfection efficiency）。此外，内毒素与DNA竞争“自由”转染试剂，影响转染实验。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞中的非特异性免疫反应，从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导蛋白质和脂类，如IL-1和前列腺素的合成。总体而言，内毒素在转染实验中是不可控变量，影响结果的可重复性，使它们难以对比、解读。在基因ZL研究中，内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补体级联，干扰研究。
操作流程
在碱性条件下，细菌细胞裂解，使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。将Endotoxin Removal Buffer加入到过滤后的裂解液中。冰浴后，将纯净的裂解物上样到阴离子交换柱上，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA选择性结合。用中盐缓冲液清除RNA、蛋白质、代谢产物和其他低分子量杂质，超纯质粒DNA被高盐缓冲液洗脱（参见QIAGEN Plasmid Kit procedures）。DNA由异丙醇脱盐、沉淀并且离心回收。
应用
使用EndoFree Plasmid Kits纯化的DNA适合多种敏感的应用，包括：
转染，包括原代、敏感和悬浮细胞的转染
基因ZL研究
基因沉默
显微注射

质粒制备中的内毒素水平*
质粒制备方法	内毒素（EU^†/µg DNA）	平均转染率^‡
EndoFree Plasmid Kit	0.1	154%
QIAGEN Plasmid Kit	9.3
2x CsCl	2.6	99%
Silica-gel slurry	1230.0	24%

无内毒素DNA配合原代细胞得到高转染率*
DNA纯化方法	细胞转染百分比
EndoFree Plasmid Kit	21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit	8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry	5.2% ± 0.74

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