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Plasmid Buffer Set制备100次mini规格、25次midi规格或10次maxi规格的转染级纯质粒或柯斯质粒DNA
Plasmid Buffer Set为QIAGEN-tips提供缓冲液,用于应用重力流技术纯化转染级质粒DNA。该缓冲液配合QIAGEN-tips可得到20 μg(Mini)、100 μg(Midi)、500 μg(Maxi)、2.5 mg(Mega)或10 mg(Giga)的DNA,依QIAGEN-tips的大小而定。离心获得澄清的裂解产物和异丙醇沉淀。
原理
QIAGEN-tips独特的阴离子交换树脂专门设计用于纯化核酸。其独特的分离特性,使纯化的DNA的纯度相当于或高于连续2次CsCl梯度离心纯化得到的DNA的纯度。预装的QIAGEN-tips利用重力流原理工作,缩短了制备质粒的手动操作时间。整套QIAGEN质粒纯化体系避免使用苯酚、氯仿、溴化乙锭和CsCl等有毒物质,减小对使用者和环境的危害。
操作流程
使用Plasmid Buffer Set,细菌裂解产物通过离心去除。澄清的裂解产物上样到阴离子交换柱(不包含在Plasmid Buffer Set内),质粒DNA在合适的低盐条件和pH条件下与树脂进行选择性结合。RNA、蛋白质、代谢产物和其它小分子杂质用中盐洗涤液去除,用高盐缓冲液洗脱获得质粒DNA。纯化的DNA用异丙醇沉淀浓缩和脱盐后,离心收集。
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