葡聚糖凝胶G-10 Sephadex G-10 medium 葡聚糖凝胶使用说明 |
化学和物理性质 |
葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶 |
液中溶胀。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分 |
离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影 |
响。 |
葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱 |
色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程,可在较低的压力下获 |
得较高的流速。另外,粗级也可用于批量工艺。 |
化学稳定性 |
葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。它在水、盐溶液、有机 |
溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的,在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶,因而应避免使用。 |
物理稳定性 |
葡聚糖凝胶并不熔融,可以在湿态、中性 PH 进行灭菌或在高压灭菌器 120 |
℃、 30 分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。 |
葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。 |
产品说明: |
产 品 名 称 分 离 范 围 应 用 |
葡聚糖凝胶 G-10 <700 缓冲液交换、脱盐,分离小分子,去除小分子 |
葡聚糖凝胶 G-15 <1500 缓冲液交换、脱盐,分离小分子,去除小分子 |
葡聚糖凝胶 G-25 1000-5000 工业上脱盐及交换缓冲液 |
葡聚糖凝胶 G-50 1000-30000 多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定 |
葡聚糖凝胶 G-75 2000-70000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 |
葡聚糖凝胶 G-100 2000-120000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 |
葡聚糖凝胶 G-150 5000-300000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 |
葡聚糖凝胶 G-200 5000-600000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定 |
使用方法: |
1. 乙醇浸泡: |
在室温下,将干粉浸泡于 50-60%乙醇中至少 24 小时,并不断搅拌以保证凝胶 |
溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干; |
2. 无盐水浸泡: |
室温下,在无盐水中充分溶胀 24 小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀, |
然后; |
3. 盐酸浸泡: |
在常温下再用 0.2N HCl 浸泡 12 小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性; |
4. 将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内, |
注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层; |
5. 上样前平衡层析柱至少 3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的 |
PH值等于上柱的 Buffer 的 PH值); |
6. 凝胶过滤的上样量一般为 5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在 1-2%的 |
床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在 40-50cm 以下,过高的凝胶层会引起较大 |
的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比 |
为 5:1 即可; |
7. 洗脱方法: |
可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱 Buffer 中加入 NaCl |
等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化; |
8. 在位清洗(CIP) |
凝胶使用十次后作一次 CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。 |
方法是以 40cm/h 用 1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡 |
缓冲液再生。 |
备注: 其它规格葡聚糖凝胶处理方法类似。 |