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1．在微量反应板每孔加入待检标本50μl，设阳性、阴性对照各2孔，每孔加入阳性（或阴性）对照各1滴，并设空白对照1孔。

2．每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。

3．弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

4．每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37℃孵育15分钟。

5．每孔加终止液1滴，充分混匀。

6．用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

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