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本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!
Chinese Name/中文名 | 大鼠维生素B6(VB6)elisa试剂盒 |
English Name/英文名 | Rat Vitamin B6,VB6 ELISA Kit |
Organism/种属 | Rat /大鼠 |
Packing/规格 | 96T/Kit 48T/Kit |
Method/检测方法 | Sandwich-ELISA/双抗体夹心ELISA |
Sample Type/样品类型 | Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血浆等其它生物样品 |
检测原理:
采用双抗体夹心法测定 大鼠维生素B6(VB6) 水平。用纯化的 大鼠维生素B6(VB6) 抗体包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入样本及标准品,并加入HRP标记的抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。颜色的深浅和样品中的 大鼠维生素B6(VB6) 含量呈正相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中 大鼠维生素B6(VB6) 浓度。
大鼠维生素B6(VB6)elisa试剂盒实验材料与试剂配制:
1. 仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。
2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液备用。
大鼠维生素B6(VB6)elisa试剂盒样品收集、处理及保存
1. 细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
2. 细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
3. 血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
4. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。
5. 体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
6. 组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000 rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
7. 样品中不能含有NaN3,因NaN3 YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
8. 保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
大鼠维生素B6(VB6)elisa试剂盒操作步骤:
1. 取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。
2. 分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。
标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
3. 加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗TPH1 抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
4.温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。
7. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
8. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。
9. 显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。
10. 终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。
11. 读板:在450nm波长读取各孔的OD值。
12. 注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。
数据计算
1. 绘制标准曲线:各标准品OD值减去底色即减去空白孔OD值,以6个标准品的OD值为纵坐标y,以标准品的浓度为横坐标x,绘制曲线图,如图示,并计算出回归方程y=ax+b。
2. 将待测样品的OD值代入方程式,计算各组样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际TPH1 浓度。
大鼠维生素B6(VB6)elisa试剂盒注意事项:
1. 实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样时,要控制加样速度,避免孔与一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。
3. 孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
5. 建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6. 建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,SY几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商联系,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。
大鼠维生素B6(VB6)elisa试剂盒安全性
1. 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
大鼠维生素B6(VB6)elisa试剂盒保存条件及有效期:
1. 试剂盒保存:2-8℃
2. 2.有效期:6个月
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8、可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
9、可检测指标齐全:炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
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