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科研产品: 褪黑素受体1A/松果体素受体1A抗体,Anti-MTNR1A/MTR-1A/MEL-1A-R抗体报价
产品编号:BYk-0027R
产品规格: 0.1ml/0.2ml
产品价格:询价(电询或联系客服QQ)
抗体来源:Rabbit OR Mouse
产品用途:科研实验,相应的标记抗体有HRP标记抗体,FITC标记,BIO等。
性 状: Lyophilized or Liquid
浓 度: 1mg/1ml
亚 型: IgG
贮 存: 贮存于-20℃.
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转膜
1、 转一张膜需准备6张7.0~8.3 cm的滤纸和1张7.3~8.6 cm的NC膜。切滤纸和膜时一定要戴手套,因为手上的蛋白会污染膜。将切好的硝酸纤维素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。 将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫,用玻棒赶走气泡。在垫子上垫三层滤纸。
3、将玻璃板轻轻撬开后剥胶,除去小玻璃板后,将浓缩胶轻轻刮去。小心剥下分离胶盖于滤纸上,用手调整使其与滤纸对齐,轻轻用玻棒擀去气泡。将膜盖于胶上,要盖满整个胶(膜盖下后不可再移动)并除气泡。在膜上盖3张滤纸并除去气泡。盖另一个海绵垫,合起夹子。整个操作在转移液中进行,要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触,接触后会发生短路。
4、将夹子放入转移槽槽中,使夹的黑面对槽的黑面,夹的白面对槽的红面。电转移时会产热,在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2 h或40 V转移3 h。
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抗原修复——原因 *常规的石蜡切片标本均用甲醛固定,结果使得: -抗原性物质形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇; -蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。 *要求:在染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态抗原修复——方法 *化学方法 *加热方法 -水浴加热法 -微波照射法 -高压加热法 -酸水解法
抗体规律
(1)初次反应产生抗体:当抗原次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗体,且抗体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。 (2)再次反应产生抗体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗体量略为降低。随后,抗体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。 (3)回忆反应产生抗体:由抗原刺激机体产生的抗体,经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原,可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同,则称为特异性回忆反应;若与初次反应不同,则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的,短时间内即很快下降。
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抗原修FF法
常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01M pH6.0)、EDTA抗原修复液(pH8.0或9.0)等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理,TBS冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或继续微波10~15min,取出微波盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时4~8 min即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。