MV3-LUC人黑色素瘤细胞-荧光素酶标记

·         产品名称：MV3-LUC人黑色素瘤细胞-荧光素酶标记

·         产品编号： CY0123

·         细胞数量： 1*10^6

·        生长特性： 贴壁

·         培养基： DMEM+10%FBS

·         形态特征： 成纤维细胞

·         传代方法： 1:2 - 1:3

·         培养条件： 胎牛血清至浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃

·         细胞描述： 当培养物达到稳定期时，细胞表现出酶肌激酶和肌酸磷酸激酶（CPK）的活性增加。 肌肉型CPK在细胞分裂停止后合成。

·         细胞冻存： 液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）

·         细胞运输： 干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

注意事项

冻存细胞接收后的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；
2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。
 

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。
 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

MV3-LUC人黑色素瘤细胞-荧光素酶标记

针对此株细胞培养更加细胞的培养说明如下：

其实，刚刚复苏的细胞就像是刚刚出生的baby，非常脆弱，需要各位小伙伴的细心呵护，不然，细胞就会被我们花样玩死。为了避免细胞不明不白的挂掉，我们就要对细胞的各种习性了如指掌。

1. 俗语道，到什么山上唱什么歌，不同细胞用不同的培养液。此时，就不得不提起培养基里的“四大金刚”—MEM、DMEM、1640、F-12，它们基本参与了90%以上种类细胞的培养过程。

MEM作为带头大哥，能力非常全面，号称是应用好广泛的细胞培养液。

DMEM作为随时紧跟老大MEM的二弟，青出于蓝而胜于蓝，浓度要高出2~4倍，可分为高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。

老三1640中规中矩，营养成分比较简单，比DMEM少一点糖和谷光甘肽，常用于淋巴细胞的培养。

小兄弟F12常用来支持CHO、Hela和L－细胞生长以及原代大鼠肝细胞和前列腺上皮细胞的培养。MEM和F12 这两种培养基各取1/2，即可形成神经生物学好通用的培养基。

2. 细胞生长的空间密度是细胞培养的关键。具体养细胞时应该摸索细胞喜欢的生长空间密度，既不能让细胞瓶里的细胞因拥挤不堪而萎靡不振；也不能让细胞浓度低于1~5×10^5个/mL而导致“孤独死”（因为细胞的健康生长需要细胞间的连接）。因而细胞接种前，要先通过细胞计数来调整细胞浓度。

3. 当培养的贴壁细胞形态不好时，可在传代时，先倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清都可以）洗涤一次，用滴管吸走，再加入3ml培养基，沿着瓶底轻轻吹打一遍，然后吸走。这时再正式进行消化、吹打。

其次，把吹打下的细胞悬液加入到含有新培养基的培养瓶内，置于培养箱里培养，按时间点观察细胞贴壁情况（10min，20min，30min）。而后迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次，然后加入完全培养基培养并观察细胞生长情况以及形态。直至找到细胞的形态为止。

4. 至于在培养瓶中加入多少培养基量，则是需要实验汪们自己去摸索的。对于生长快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基，细胞形态会更好，但是要注意对换液时间的把握。

5. 如何选择培养瓶。一般，生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，那么采用塑料瓶会比玻璃瓶的效果好；生长速度快的细胞，用玻璃瓶培养的效果会更好。因此，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候（比如细胞刚复苏时或者原代培养），塑料瓶会好一点；而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。

6. 细胞冻存时，盖子要拧紧，不然复苏水浴时会渗水，造成细胞污染。因而冻存管要选择原配的管子和盖子（不同Pai子、型号的管子会有差别），盖子拧紧后好好用封口膜封住。且每支冻存管都要标上细胞的名称、冻存时间，并记录在册，以免后续复苏细胞时，取错细胞。

7. 细胞冻存时要严格进行梯度降温（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）。要知道冰火两重天的生活环境只会让娇弱的细胞自爆身亡，谨记：缓降温！但如果真心赶时间时，可以使用细胞冻存盒进行细胞冻存，而后尽快将其转入液氮中。此外，要定期测量液氮罐里的液氮储备，以保证细胞全部浸在液面下。

8. 细胞解冻时，由于冻存管管壁较厚、隔热，而导致水浴时间太长（2min还没融化）时，可以将水浴锅的温度调至40℃左右，可以缩短解冻时间。

9. 提前预定超净台，减少复苏后插在冰盒里等待的时间，可避免细胞房人满为患，超净台使用紧张，复苏1h后，还没有加入新的培养液。（高浓度DMSO防止胞内形成冰晶，冻存时保护细胞，但复苏融解后，浸泡时间太久会对细胞有毒性）

10. 复苏细胞时一定要有耐心，因为有些细胞在复苏一星期后才会真正有起色。因而，尽管细胞在复苏三四天后没有任何动静，也不要轻易倒掉所有细胞，要耐心等待，两周后再做决定。

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