抗万古霉素肠球菌(VRE)显色培养基使用说明书
法国科玛嘉VRE显色培养基
用于耐万古霉素粪肠球菌(E.faecalis)和尿肠球菌(E.faecium)的鉴定和计数。
【组分】
琼脂 15.0g/L
蛋白胨和酵母浸出物 20.0 g/L
色素 27.3 g/L
盐类 5.0 g/L
PH 6.8±0.2
根据需要,可以进行经典配方的调整或补充。
【操作】
- 称取瓶内干粉67.3g,用1000ml蒸馏水或纯水溶解,可以按照67.3 g/L的比例扩大或 缩小。
- 将上述干粉缓慢倒入蒸馏水中,充分搅拌直至琼脂完全溶解。
- 加热至100℃,并且不断搅拌。如果使用高压锅,请不要加压,加热不能超过100℃。使用微波炉加热时,在煮沸后立即移出微波炉并不断搅拌,而后移入微波炉再加热,直至完全溶解(大气泡代替泡沫产生,大约需要2分钟)。
- 把VRE基础培养基冷却至45-50℃备用,此基础培养基为乳白色。
- 取增补剂一瓶,加入1ml 54%酒精溶解,以无菌操作把增补剂加入到备用的基础培养基中,轻轻混合均匀(使其终浓度为60mg/L),避免气泡,也可按照60mg/L的比例扩大或缩小 。
- 使用倾注程序:准备直径为90mm的已灭菌的带盖培养皿,每个培养基接种1ml样品,然后倾注混合均匀的培养基 15±1ml,混合均匀使其凝固,倒置,37℃培养16小时 ,24小时 和48小时,观察结果 。
- 如果使用表面接种程序:将培养基倾注于已灭菌的培养皿中(用前贮存于2-8℃,避光,接种前应先恢复至室温)。样品划线接种或者涂布接种于 培养基表面,在37℃培养18小时,24小时和48小时,观察结果。
【贮存】
1、法国科玛嘉VRE显色培养基干粉需保存在15-30℃干燥环境中,增补剂保存于2-8℃环境下。
2、倾注好的培养基在室温可保存一天,2-8℃冰箱中避光可以贮存两星期。
【结果】
微生物 | 菌落颜色 |
VRE粪肠球菌 、尿肠球菌 VRE鸡肠球菌、铅黄肠球菌 其他革兰氏阳性细菌 革兰氏阴性菌 | 玫瑰色至紫色 蓝色或被YZ 被YZ 被YZ |
★ 极少数其他菌属菌株如乳酸杆菌素可能呈现很小的紫色菌落。
★ 使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃。