95-D-LUC人高转移肺癌细胞-荧光素酶标记

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悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。

产品优势

95-D-LUC人高转移肺癌细胞-荧光素酶标记 分离自脑组织；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂，沟或裂之间的隆起叫回，它们大大增加了大脑的表面积；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和ZY沟。由于三沟裂之界隔，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。小胶质细胞是神经胶质细胞的一种，相当于脑和脊髓中的巨噬细胞，是神经系统（CNS）中的道也是*主要的一道免疫防线。小胶质细胞大约占大脑中的神经胶质细胞的20%，小胶质细胞不停地清除着神经系统中的损坏的神经，斑块及感染性物质。无数临床上和神经病理学研究表明激活的小胶质细胞在神经退化类疾病的发病机理中起到十分重要的作用，如帕金森病、多发性硬化和阿兹海默症等。但是过多激活或失控的小胶质细胞会引起神经毒性。它们是促炎因子和氧化应激的重要来源，如肿瘤坏死因子（TNF），一氧化氮，白介素等有神经毒性的物质。神经小胶质细胞的主要功能：①神经胶质出现在大脑发育早期向成熟阶段转化的过程中；②当程序性细胞死亡时，或在大脑发育的过程中，神经系统受损或受到病理损坏时，神经胶质可做为大脑的巨噬细胞；③胶质细胞能在Ⅱ类组织相容性复合体表达CD-4阳性T细胞时表达抗原，能进行Fc介导的巨噬作用，并且与造血细胞和巨噬细胞组织共享抗原。

本公司培养的细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经PCK/TG免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

参数规格

 1） 含量：>1x106 个/mL

 2） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

 3） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

 （1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

 （2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

 （3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

 用途：仅供科研使用。

95-D-LUC人高转移肺癌细胞-荧光素酶标记

 1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

 2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

 3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。

 4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

 5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

  细胞培养步骤

 一．培养基及培养冻存条件准备：

 1） 准备L-15培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

 2） 培养条件： 气相：空气，。 温度：37摄氏度。

 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

 二． 细胞处理：

 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

 3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

 4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

 注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

 3） 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

 下面T25瓶为例；

 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至*终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

 3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

95-D-LUC人高转移肺癌细胞注意事项

 1.收到95-D-LUC人高转移肺癌细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

 2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

 3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

 4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

合作单位

经过多年的不懈努力，我公司合作的单位有：复旦大学华山医院，中山医院，山西中医药大学：贵州达灵药业，武汉巴菲尔生物，杭州启新生物，容大生物，郑州大学，东南大学，成都华健未来生物，同济大学，广州中医药大学，河南大学，上海大学，柳岸生物技术有限公司，中山大学附属第三医院等等。。。。。。