生研血清 单增李斯特菌H群诊断血清4支套装

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日本生研 单增李斯特菌H群诊断血清4支套装

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广州健仑生物有代理日本生研、丹麦SSI、德国Sifin、泰国血清：

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(1) 将RNase粉末溶于10mM的乙酸钾（即Buffer P3），配制成浓度为10mg/ml的溶液。
(2) 将配好的RNase溶液100℃加热10min, 随后冷却至室温。
(3) 用1M 的Tris-HCl调节pH值至7.4，大约需要0.1体积的Tris-HCl。
(4) 分装RNase溶液于1.5ml EP管中，-20℃保存。
三、操作步骤
准备工作：
大提质粒的前两天用50ml离心管摇菌，在5-7ml加有氨苄抗生素AMP的LB液体培养基中挑菌，37℃下摇菌12-16h。
大提质粒前一天将50ml离心管摇好的菌液500ml大三角瓶中加入含有氨苄抗生素AMP的LB液体培养基200ml，37℃下摇菌12-16h。
1. 沉淀菌液：向离心机配套的50 ml离心管中，加入30 ml菌液，6000 g离心10min, 大约沉淀菌液200 ml。(注意：配平离心管，离心时要在离心管壁和盖上都做好标记，且离心时写字的管壁侧朝向外，以便容易找到沉淀物)。离好一管，取回弃去上液保留沉淀物，再反复离心直到所有200ml菌液全部离完），打开盖倒置吸水纸上控干。
2. 溶解沉淀: 量取10 ml Buffer P1, 加入100μl RNase A, 混匀后，加入到离心沉淀的菌中，用振荡器充分溶解菌液沉淀（可用15ml离心管量取， Buffer P1 加入沉淀离心管是管口不要接触，以防互相污染）。
3. 加入10 ml Buffer P2，液体呈现蓝色，轻轻混匀，使其充分反应，冰上放置2-3min即可。（此步主要是碱裂解细菌，使其中的蛋白质和DNA变性，反应时间不能太长，否则容易使大肠杆菌的基因组DNA断裂成小片段，污染质粒DNA）