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日本生研 荚膜型肺炎链球菌8种混合血清(日本生研)
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但实验证明,大多数限制酶对裸露的酶切位点不能有效切断。尤其当酶切位点位于片段末端时,通常的限制性内切酶的酶切效率都很低,有的酶甚至不能切断。因此,为了将PCR产物直接克隆到目的载体,就需要在设计引物时在酶切位点两端加入1-3个碱基的保护性碱基,才能使所设计的限制酶对其识别位点进行有效切断(参考文献:Zimmermann K, Sch?gl D, Mannhalter JW. Digestion of terminal restriction endonuclease recognition sites on PCR products. Biotechniques, 1998,24(4):582-584. )。
有人对十余种常用的限制性内切酶进行了实验,分别比较了各种限制酶在其酶切位点末端分别加1、2、3个保护碱基和不加保护性碱基的切断情况。表中的:(-) 为不能切断;(±) 为部分切断;(+) 为能完全切断。
结果显示,基本上所有限制酶,在其酶切位点旁边加上3个以上的保护碱基后,都可以对其酶切位点进行有效切断。因此在进行PCR产物克隆实验时,在设计引物的时候通常要在末端再添加3个碱基,即保护性碱基。当然,如果实验设计先将PCR产物克隆到T载体,再亚克隆到目的载体,那么添不添加保护性碱基都可以。
做蛋白的人几乎都会涉及到包涵体的变性溶解与复性。在包涵体的变性溶解及复性过程中Z常用的试剂是盐酸胍和尿素,那么这两种试剂有什么区别呢?