参考 | 质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 赖氨酰肽链内切酶(Lysyl Endopeptidase)Z初由Masaki等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切除赖氨酸残基C末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键,用于蛋白测序和Lys-X 化合物的酶催化合成。上海惠诚生物专业提供多种级别赖氨酰肽链内切酶,该酶稳定性高,在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小时之后,仍然拥有完整的生物活性。 质谱级赖氨酰肽链内切酶是质谱分析前处理时Z常用的蛋白分解酶。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶,可更好地切断赖氨酸基团的多肽,增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装,是方便使用的冷冻干燥品。 质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 理化特性 表1赖氨酰肽链内切酶理化特性表 外观 | 冻干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl buffer,pH 8) | 活性 | 0.03~0.07AU/vial | 分子量 | 27,000(凝胶过滤);30,000 (SDS-PAGE) | 溶解性 | 易溶于水或缓冲液 | Z佳pH | 9.0-9.5(酰胺酶的Z佳活性pH) | 等电点 | 6.9-7.0 | YZ剂 | DFP、PMSF、TLCK | 来源 | 细菌 | 稳定性 | 溶于pH 值5.0-12.0 的Tris缓冲液中,可于4℃稳定保存2年。溶于pH 值6.0-11.0 的缓冲液中,可于30℃稳定保存,但是50℃及以上不稳定。 | 单位定义 | 一单位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生1 μmol 对硝基苯胺所需的酶量。 | 底物特异性 | 水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA | 非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA |
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 产品特点 - 高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析
- 提高裂解效率、增加肽段数量
- 根据使用量特意制备小包装,方便使用
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 应用实例 分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lep) 和Tp 与Lep联用进行胶内酶切的效果比较:牛血清蛋白BSA 的条带(100ng) 通过SDS-PAGE 获得,然后分别用Tp、Lep 和Lep+Tp 进行酶切,再用MALDI-TOFMS 法进行分析。蛋白酶的实验效果如下表: 表2 Tp、Lep 和 Lep+Tp 的蛋白酶酶切结果对照 | Tp | Lep | Lep +Tp | 裂解位点 | 精氨酸和赖氨酸的C端 | 赖氨酸的C端 | 精氨酸和赖氨酸的C端 | 错误裂解率 (错误裂解所占比例) | 多(8%) | 很少(0%) | 少(3%) | 鉴定出的多肽数量 | 17 | 19 | 22 |
结果表明 Lep 酶解的错误裂解率,Tp酶解时加入Lep后,错误裂解率有所降低,同时,可以鉴定出更多的多肽。 图1 胰蛋白酶 (Tp)(图 a) 和赖氨酰肽链内切酶 (Lep)+Tp (图 b) 酶切后的质谱结果对照图。
Lep+Tp酶切后,可以在m/z=2000时得到吸收峰,而单独的Tp酶切在m/z=2000时没有吸收峰。该结果表明Lep可以提高测序覆盖度。 质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 产品列表 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | Lysyl Endopeptidase, MS Grade 赖氨酰肽链内切酶,MS级 | 20μgx5 | 质谱级 | Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶 | 1vial(2AU) | for Biochemistry | Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶 | 1vial(10AU) | for Biochemistry |
质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 参考文献 - Wada, Y., and Kadoya, M.: J. Mass Spectrom., 38, 117 (2003).
- Shevchenko, A., Wilm, MM., Vorm, O., and Mann., M.: Anal. Chem., 68, 850 (1996).
- 质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase
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