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3、微孔板筛选技术
将靶物质加入微孔板内,经过一段时间孵育后加入核酸文库序列,能与靶物质结合的随机单链可留在微孔板上。该方法利用聚苯乙烯材料特有的吸附作用固定靶物质,稳定性较好,多用于细菌的表面大分子为靶物质的适配体筛选。Han等筛选金黄色葡萄球菌适配体时,以细菌表面的磷壁酸为靶物质,将其包被在96孔板上,加入RNA序列文库,室温下孵育20 min,用缓冲液冲洗后,能与靶物质特异性结合的RNA单链留在微孔板中,分离出能与金黄色葡萄球菌结合的适配体。
4、磁珠分离法
小分子靶物质可以固定在磁珠上,与适配体序列文库共同孵育后在外加磁场的作用下可以实现分离,而后通过加热或加碱等方法使适配体序列与靶物质分开。Mann等以分子量很小的乙醇胺(Mr= 61.08)为靶物质,将其固定在磁珠上。加入核酸序列文库后振荡孵育30 min,利用磁性材料的分离富集效应去除未与乙醇胺结合的核酸序列,而后加入含有尿素及EDTA的缓冲液提取结合在靶物质上的核酸序列,进入下一步扩增富集,筛选出6条性能良好的适配体。
5、柱层析分离法
将靶物质结合在树脂层析柱上,适配体序列文库与靶物质孵育后,能特异性结合的序列可以留在层析柱上,达到分离的目的。有人将靶物质伏马毒素B1固定在凝胶树脂亲和层析柱上,注入含有核酸序列文库的溶液,用结合缓冲液反复冲洗层析柱,成功分离出与伏马毒素B1结合解离常数为100±30 nmol/L的适配体序列。