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3、蛋白质溶液的体积放大程度:硫酸铵饱和溶液>>固体硫酸铵
这是使用硫酸铵饱和溶液Z头痛的部分,举例来说,要让100 m的硫酸铵百分比从0%到25%,如果是加入固体的硫酸铵,只会让溶液从100 ml变成107 ml左右,但若是加入硫酸铵饱和溶液,会让溶液变成125 ml。而且若是要提高到50%,须加等量的硫酸铵饱和溶液,所以会让蛋白质溶液从100 ml变成200 ml。
细菌靶标与核酸适配体结合的亲和力和特异性是评价所筛选的适配体的重要参数。通常用靶标-核酸复合物的平衡解离常数Kd表征相互作用。Kd值越小,表明两者相互作用越强。当使用梯度浓度的核酸与靶标共同孵育后,检测核酸适配体-靶标复合物的浓度,按下述公式即可求算出Kd值。
Y=Bmax X/(Kd + X)
上述公式中:
Y:核酸适配体-靶标复合物浓度;
X:核酸浓度;
Bmax:常数。
Kd测定时可使用荧光标记的核酸。
通过测定复合物的荧光强度求算Y值,Y值的确定有多种方法:
1、荧光成像法
将荧光标记的核酸与靶标的孵育混合物经离心去除未结合的适配体后,置于荧光显微镜下观测,直接对带有荧光的成像菌体计数,可求出Y值。
2、荧光光谱法
将核酸与靶标的孵育混合物通过离心等方法分离后,使用荧光光谱仪测定核酸-靶标复合物的荧光强度,可作为Y值。