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广州健仑生物科技有限公司
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(二)肠道粘膜微生物取样方法
1、在无菌环境中将整个肠道移出体外;
2、取不同部位肠段,然后在肠系膜的对面纵向切开,使肠腔外露;
3、用无菌取样器对内容物进行取样、保存;
4、将肠道内容物清理干净后,用无菌生理盐水轻轻清洗肠腔,清除看得见的肠容物(避免扰乱肠粘膜);
5、用无菌载玻片轻刮肠道粘膜(避免穿透基底膜)。所有样品取完后立即放入液氮冷冻,并放在-80℃冰箱保存。
可参考:Yasuda K, et al. Biogeography of the intestinal mucosal and lumenal microbiome in the rhesus macaque [J]. Cell host μbe,2015,17(3):385-391.
肠道粘膜微生物DNA提取方法推荐试剂盒:MP BIO FASTDNA? SPIN Kit for Soil (MP Bio, Santa Ana, CA)
(三)瘤胃微生物
样本制备及DNA提取可参考:Singh K M, et al. Methanogen diversity in the rumen of Indian Surti buffalo,assessed by 16S rDNA analysis [J]. Research in veterinary science,2012,92(3):451-455.
四、生殖道微生物
1、48h内无性行为,不得进行*清洗、上药等改变菌群结构的行为,30天内不能用抗生素和抗真菌类药物;
2、用无菌棉签充分取样,用无菌剪刀剪下棉签头部,放入装有Amies培养基的无菌离心管中,置于冰上带至实验室-80℃保存;
3、样本珍贵,需进行多管备份保存;
4、提取DNA时将棉签解冻,漩涡处理5min以重悬细胞。
生殖道微生物DNA提取方法:推荐试剂盒:QIAamp DNA Mini Kit(Qiagen)