荧光滤光片选择

 　荧光滤光片选择　

荧光滤光片英文名称Fluorescence Filters，广泛应用在生命科学和生物医学领域，主要作用是在生物医学荧光检验分析系统中分离和选择物质的激发光与发射荧光的特征波段光谱。

　　荧光滤光片一般采用单片无色透明的玻璃作为基底，在玻璃的两个表面镀膜。增反膜的厚度会选择为半波长的整数倍，此时反射叠加增强；增透膜的厚度为1/4波长的倍数，此时投射叠加增强。荧光滤光片指的是各种荧光滤光片，滤光片一般用于各种显微镜中，使人们能够更方便的观测各种荧光现象。滤光片通常用到的显微镜有荧光显微镜、激光扫描共聚焦荧光显微镜（LSCM）、共聚焦显微镜、和全内反射荧光显微镜（TIRFM）。

　　荧光滤光片选择

　　荧光滤光片选取的原则是在成像端尽可能让荧光/发射光透过，同时完全阻挡激发光，获得高的信噪比。尤其是对于多光子激发和全内反射显微镜的应用，微弱的噪声也会对成像效果造成很大的干扰，因此对信噪比的要求更高。

　　通常我们看荧光滤光片的参数一般会看透射率光谱，但往往荧光相对于激发光的强度很弱，选择荧光滤光片更需要参考阻挡深度光谱图——OD值。OD值更能直观地反映滤光片对光的阻挡特性。

　　在选择激发滤光片和发射滤光片时，两者的阻挡深度光谱交点（OD交点）是重要的判断标准，一般要求宽场光源激发是交点OD值大于5，激光激发时大于OD6，以实现较好的荧光信噪比。

　　荧光滤光片的分类方法：

　　根据使用目的的不同，滤光片可分为TIRF滤光片、干涉滤光片、全内反射滤光片、Raman滤光片、拉曼滤光片、FISH荧光滤光片和应原位杂交滤光片。

　　根据滤光片本身功能的不同，其可分为激发滤光片、发射滤光片、二向色镜/二向色滤光片/二色镜、陷波滤光片、燃料滤光片、荧光素滤光片、ND滤光片、中性滤光片、中性灰度镜、截止滤光片、高通滤光片、低通滤光片、带通滤光片、紫外滤光片和UV滤光片。

　　荧光滤光片根据主要应用领域，滤光片又可分为生物滤光片、医学滤光片和天文学滤光片。

　　好的荧光滤光片的特征：

　　1. 和燃料的激发峰、发射峰匹配，且交叠小

　　2. 截止深度深

　　3. 自发荧光小

　　4. 荧光滤光片透镜面形好，利于荧光成像的提取。如果透镜表面的平整度不好，则会产生波前扭矩或楔角，波前扭矩会改变聚焦或成像位置，一般透射波前扭矩（TWD）比反射波前扭矩（RWD）对成像的影响更加直接，也会有更严格的要求。

　　荧光滤光片使用注意事项：

　　1、在平时的使用荧光滤光片过程中应当尽可能小心的取放，同时注意外部环境，避免衣服的拉链、钮扣等划伤到荧光滤光片，或者把荧光滤光片。

　　2、接触荧光滤光片时要带指套，避免手上的盐和酸性物质腐蚀基片表面。

　　3、取拿荧光滤光片时要手拿滤光片边缘，即使是带着指套的情况下，也不要接触滤光片的透光面。

　　4、荧光滤光片应被放置在柔软干净的物体上，不能放在玻璃、金属、桌子，或者不干净的纸上。 置于肮脏或有灰尘的环境中。

　　5、储存荧光滤光片时应放置在干净的电容纸或者专用的透镜清洁纸里包好。储存温度好在23℃左右，湿度不高于40%。放在干燥的储存柜里更好。

　　6、不要把荧光滤光片都堆叠在一起，避免磨损。