德国进口 埃博拉病毒快速检测试剂盒

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德国进口 埃博拉病毒快速检测试剂盒

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三、同源重组用载体的构建

从W?噬菌体扩增一个374 bp的片段（包括W?噬菌体阅读框wp39?wp40及其之间的序列和wp40的5’端序列）作为同源重组盒的5’端序列（序列见33 312–33 686位，GenBank accession number DQ289555）。一个383 bp的wp41区域片段（位于W?基因组的35 948–36 331 bp位5）作为同源重组盒的3’端序列。这两个片段克隆到luxAB表达盒两端，并加入抗性筛选标记Spc基因。

四、同源重组筛选W?::luxAB

将构建的同源重组载体电转化到含W?噬菌体的蜡样芽孢杆菌ATCC4342溶原菌，用含Spc的平板培养基筛选电转化后的重组菌株（重组菌株具有生物发光特性）。重组菌株接种于含Spc的液体BHI培养基，30℃培养18h。筛选发生了同源重组的W?::luxAB噬菌体，以用于建立炭疽芽孢杆菌的快速检测系统。

PP01噬菌体是由Morita等从猪粪便中分离到的裂解性噬菌体[1]，对O157:H7菌株具有型特异性。Oda等[2]建立了利用GFP报告噬菌体快速检测EHEC O157的方法，GFP报告基因被整合到PP01噬菌体。PP01-GFP报告噬菌体检测方法具有快速、特异等优点，但与其它基于GFP的检测方法一样，需要高能光源来激发GFP（即需要荧光显微镜），这限制了该方法的实际应用。

Brigati等[3]利用lux作为报告基因建立噬菌体检测技术。利用luxI-luxR基因编码群感应系统，首先将luxCDABE操纵子和转录调节基因luxR克隆到生物报告细菌，然后将luxI基因整合到噬菌体，利用重组噬菌体感染靶细菌后产生的扩散性分子OHHL使生物报告细菌发光。