登革热金标试纸 登革热金标快速检测试纸

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广州健仑生物科技有限公司

SD一直在开发快速诊断测试，使人们能够在早期阶段诊断各种疾病，自1999年2月成立以来，SD蓬勃发展，现已发展成为体外诊断的领道者，他们的主要产品，如疟疾、登革热、艾滋病毒和梅毒，是世界的拳头产品。这些产品通过诸如世卫组织、儿童基金会、政府采购和海外分销商等国际组织向120多个国家供应。其已经通过世界卫生组织资格审批的有产品有：丙肝、疟疾、HIV的检测试剂。其更是世界上地一个开发出疟疾ELISA试剂盒，地一个研发出登革热快速检测、流感病毒A／B（H1N1）快速检测、禽流感快速测试。

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一、W?噬菌体的诱导、分离和增殖

利用蜡样芽孢杆菌（B. cereus）ATCC 11950株（含有W?溶原性噬菌体）诱导W?溶原性噬菌体，增殖纯化噬菌体。

1、接种ATCC 11950单菌落到2ml BHI培养基，37℃培养16h。

2、细菌培养液涂BHI琼脂平板，并分别加入磷霉素钠盐（phosphomycin disodium salt）至终浓度为20、30和40μg/ml，37℃培养17-20h。

3、挑取中间透明区再划线接种于BHI磷霉素平板，37℃培养过夜后会形成特征性的油炸圈形菌落（donut-shaped colonies）。

4、挑取中间透明区，与SM液混匀，0.22μm滤膜过滤CJ。

5、噬菌体单斑用蜡样芽孢杆菌ATCC4342扩增培养后，保存于SM缓冲液。

二、构建luxAB表达盒

利用PCR从pQF110（ATCC77113）扩增到哈氏弧菌（Vibrio harveyi）的luxA和luxB基因，定向克隆到pBluescript-SK– (Stratagene)，启动子pro2被克隆到luxAB基因上游，转录终止子TL17被克隆到下游，从而构建出luxAB表达盒。表达盒两端有酶切位点，有利于亚克隆到大肠杆菌/芽孢杆菌穿梭质粒pHP13。

三、同源重组用载体的构建

从W?噬菌体扩增一个374 bp的片段（包括W?噬菌体阅读框wp39?wp40及其之间的序列和wp40的5’端序列）作为同源重组盒的5’端序列（序列见33 312–33 686位，GenBank accession number DQ289555）。一个383 bp的wp41区域片段（位于W?基因组的35 948–36 331 bp位5）作为同源重组盒的3’端序列。这两个片段克隆到luxAB表达盒两端，并加入抗性筛选标记Spc基因。

四、同源重组筛选W?::luxAB

将构建的同源重组载体电转化到含W?噬菌体的蜡样芽孢杆菌ATCC4342溶原菌，用含Spc的平板培养基筛选电转化后的重组菌株（重组菌株具有生物发光特性）。重组菌株接种于含Spc的液体BHI培养基，30℃培养18h。筛选发生了同源重组的W?::luxAB噬菌体，以用于建立炭疽芽孢杆菌的快速检测系统。